规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程3.doc

湖南省肿瘤医院 湖南省肿瘤医院 检验科 Clin Lab.HNZL 标题：血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 文件编号：HNZLYY/LAB-SOP-WSW-601 版本号：2 修改号：0 生效日期：2013-07-01 发行部门：质量管理小组 编制人：陈建国 审核人：肖平 批准人：吴白平 页码：第 PAGE 8 页 共 NUMPAGES 62 页 目的 规范血液及骨髓标本细菌学标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 适用范围 血液及骨髓。 标本 3.1 标本类型　血液及骨髓。 3.2 标本采集　 3.2.1 采血时间　抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。 3.2.2 采血频率　对怀疑菌血症的成人患者，推荐同时在不同部位采集2~3套（每套包括一瓶需氧瓶，一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶）对感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采集；婴幼儿患者，推荐同时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。 3.2.3 采血量　以无菌方法从患者肘静脉或股动脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血10-20ml，儿童为3-5ml。血液抽出后，立即以无菌操作注入血培养瓶，充分混合后送检。 3.2.4 骨髓标本　用骨髓穿刺针从髂骨采集1-2ml,立即以无菌操作注入血培养瓶，由于骨髓标本量少可选择小儿需氧瓶及厌氧瓶。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 血培养瓶破裂或有明显污染。 3.3.2 培养瓶标识与化验申请单不符。 3.3.3 用过期的培养瓶采集标本，采血量不足等。 3.3.4 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰箱。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措施。 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、沙保罗平板相关生化试剂等。 4.2 BACT 9050全自动血培养系统、ATB Expression鉴定及药敏分析仪。成人需氧血培养瓶，厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、TDR系统鉴定卡及药敏板。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2 培养、生物安全柜等。 4.4 试剂的有效期和使用参照试剂说明书。 细菌鉴定和药敏质控 参见《微生物组室内质量的控制程序》。 检验步骤 接收标本后，立即用Lis系统签收对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记联系电话等病人信息。 6.1 自动化培养 6.1.1 置全自动血培养仪中。当标本有菌生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医生报告，同时转种血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5% CO2 培养箱培养18~24h。若涂片为酵母样真菌时，转种到念珠菌培养基上。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用相应卡片上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K-B法药敏试验（具体操作见《药物敏感性试验标准操作规程》 6.1.2仪器培养为阴性，报阴性后卸下血培养瓶，可报阴性结果。 6.2 手工培养 6.2.1 将血培养瓶置35℃ 6.2.2 盲目传种后，培养瓶继续孵育至第5日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继续培养，下列几种情况提示有细菌生长。见下表1。 表1 培养瓶中有细菌生长时的不同反应 反应 菌种 浑浊并有凝块 金黄色葡萄球菌 均匀浑浊，发酵葡萄糖产气 大多为革兰阴性菌 微浑浊，有绿色变化 肺炎链球菌 表面有菌膜，培养液清晰，底层溶血 枯草杆菌 表面有菌膜，膜下呈绿色浑浊 铜绿假单胞菌 血细胞层上面出现颗粒状生长，有自上而下的溶血 溶血性链球菌 厌氧培养瓶有变化，而需氧培养瓶无细菌生长 可能为厌氧菌 根据肉眼观察，对有细菌生长迹象，取菌悬液涂片作革兰染色，同时分离培养，接种需氧血琼脂平板，中国蓝平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35℃、5%CO2 培养箱培养18～24h。 操作流程 血液、骨髓 血液、骨髓 置血培养仪瓶中 置血培养仪瓶中 厌氧培养需氧培养 厌氧培养 需氧培养 血培养仪报警，挑取培养物 血培养仪报警，挑取培养物 涂片、染色 涂片、染色 细菌种类 细菌种类 转种平板35℃培养18 转种平板35 培养18～24 h 直接药敏 二级报告一级报告 二级报告 一级报告 观察菌落特征 观