六植物总RNA的提取及检测.PPTVIP

实验原理：LiCl最终浓度为2 mol/L 0.8 mol/L直接沉淀大分子RNA（包括rRNA和mRNA）需要注意的是Li离子对反转录酶有抑制作用，而Cl离子能抑制蛋白质合成的起始步骤，所以在mRNA反转录和体外翻译实验前不要使用LiCl沉淀DNA和RNA ①所用所有试剂： Tris- CTAB：与RNA结合 β-巯基乙醇：防止被氧化 Tris饱和酚、氯仿：去蛋白质 5L LiCl、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/L NaAc：使RNA沉淀 1×TAE、 BW：配制凝胶 Gol-rad或gold-view和6×loading buffer :前沿指示剂 ddH2O ②所有材料 用具 试剂瓶 、250烧杯 玻璃棒 250容量瓶 记号笔 天平 一次性手套 钥匙、 液氮 研钵、冰、线手套、枪、枪头、高压锅、电泳照相系统 离心机 、混摇机、恒温水浴、电泳仪、电泳槽 ③实验准备： 1、CTAB 5g 直接加入试剂瓶（防止起泡） 2、NaCl 20.44g + 0.5M EDTA 12.5ml 用ddH2O 定容至225ml 3、空瓶贴标签加适量（100或50ml）的ddH2O LiCl NaAc 70%乙醇 氯仿 ddH2O 4、6个瓶 + 0.1%DEPC 在通风橱里戴双层手套，充分摇匀，气泡不很快消失 5、37度保温过夜 注意事项：