太子参不定根组织培养的研究--毕业论文设计.docVIP

l 太子参不定根组织培养的研究 [摘要] 目的：对太子参不定根的培养条件进行系统的优化。方法：利用组织培养技术结合紫外分光光度法，考察了接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度、培养天数、逐级扩大培养以及不同角度鼓泡式反应器对太子参不定根生长的影响，并对不定根中皂苷、多糖和氨基酸等成分进行含量测定。结果：每1 l培养基接种的不定根鲜重为6 g时，太子参不定根的干重增殖倍数达到最大值；随着蔗糖浓度的升高，太子参不定根干重增殖倍数呈先升高后降低的趋势；培养基中的无机盐浓度对不定根的生长有较大影响，3/4 ms最有利于不定根的生长；太子参生长呈“s”型曲线，在第28天生物量达到最大。结论：接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度、逐级扩大培养以及反应器角度都会显著影响太子参不定根的生长，不定根中的皂苷和氨基酸含量高于栽培的太子参，而多糖含量低于栽培的太子参。 [关键词] 太子参；不定根；接种量；蔗糖浓度；盐浓度；生长曲线；逐级扩大培养；成分含量 [稿件编号] 20121010007 [基金项目] 国家“十一五”科技支撑计划专项（2006bai06a16-02） [通信作者] *高文远，tel/fax：（022e-mail： pharmgao@tju.edu.cn 太子参pseudostellaria heterophylla（miq.） pax为石竹科植物，又名孩儿参、童参，其块根含有皂苷、多糖、氨基酸等活性物质。其性味甘、微苦，平，归脾、肺经。具有益气健脾，生津润肺的功能，主要用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳[1]。现代药理研究表明其有抗疲劳、抗应激作用，并有促进免疫作用及延长寿命之功能[2]，其中太子参皂苷还具有抗病毒作用[3]。目前利用植物组织培养技术进行中药资源繁殖，并大规模生产其有效成分已越来越受到人们的重视，但药用植物细胞培养的弊端之一是有效成分的含量不稳定，这主要是由于大多数有效成分均为次生代谢产物，其在细胞阶段合成表现不强，而不定根组织培养技术可以解决这一问题[4]。目前太子参愈伤和悬浮细胞培养已经有学者进行了研究[5]，而太子参不定根培养迄今为止还没有相关报道，本实验旨在利用组织培养技术快速获得太子参的不定根，为进一步大规模生产其有效成分建立技术平台。 1 材料 hpg-280b光照培养箱（哈尔滨东联电子技术开发有限公司）；hny-82型摇床（天津市欧诺仪器仪表有限公司）；mettler toledo delta 320 ph 计（上海梅特勒-托利多仪器公司）；sp-2000 uv型紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。 太子参经天津大学高文远教授鉴定为太子参p. heterophylla；人参皂苷rb1对照品（批号110704-200420，中国食品药品检定研究院）。 2 方法 2.1 接种量对太子参不定根生长的影响 将太子参不定根接入装有100 ml ms液体培养基（含3.0 mg·l-1iba，0.5 mg·l-1kt和0.1 mg·l-1 naa）的250 ml三角瓶内，接种量分别为2，4，6，8，10 g·l-1。灭菌前培养基ph 6.0，摇床转速120 r·min-1，生长周期28 d，每组重复3瓶。 2.2 蔗糖质量浓度对太子参不定根生长的影响 将约0.6 g（鲜重）太子参不定根接种到蔗糖质量浓度分别为30，40，50，60 g·l-1的100 ml ms培养基（含3.0 mg·l-1iba，0.5 mg·l-1kt和0.1 mg·l-1 naa）中，灭菌前培养基ph 6.0，摇床转速120 r·min-1，生长周期28 d，每组重复处理3瓶。 2.3 盐浓度对太子参不定根生长的影响 将约0.6 g（鲜重）太子参不定根接种到无机盐浓度分别为1/2，3/4，1，3/2 ms的100 ml ms培养基（含3.0 mg·l-1iba，0.5 mg·l-1kt和0.1 mg·l-1 naa）中，灭菌前培养基ph 6.0，摇床转速120 r·min-1，生长周期28 d，每组重复处理3瓶。 2.4 摇瓶培养中太子参不定根生长曲线的考察 将太子参不定根接入100 ml ms培养基（含3.0 mg·l-1iba，0.5 mg·l-1kt和0.1 mg·l-1 naa），接种量6 g·l-1，在太子参不定根整个培养周期中，分别于第0，4，8，12，16，20，24，28，32 d进行取样，测定其生长量。灭菌前培养基ph 6.0，摇床转速120 r·min-1，每组重复处理3瓶。 2.5 不同角度的反应器对太子参不定根生长的影响 将太子参不定根接种至锥角角度分别为60°，90°，120°，180°的3 l鼓泡式反应器中，附加2 l ms液体培养基（含3.0 mg·l-1iba，0.