免疫荧光检测技术-动物检疫检验技术专业.PDFVIP

动物检疫检验技术 专业教学资源库 免疫荧光检测法 （Immunof luorence assay，IFA） 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 阳性 阴性 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 荧光物质与荧光 • 荧光物质 – 是一类能吸收激发光的光能而发射荧光 的物质。 • 荧光 （fluorescence ） – 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从 基态跃迁到激发态，当其回复至基态时 ，以发射光形式释放 出能量，此发射光 称为荧光。 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 荧光淬灭 • 定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱 甚至消退称为荧光淬灭。 - （如紫外线照射、高温 （≥20℃）、苯胺、酚、硝基苯、I 等 ） • 荧光淬灭是由于激发态电子不能回复到基态， 所吸收的能量无法以荧光的形式发射。 • 可在封片液中加入抗荧光淬灭剂。 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 常用的荧光物质 荧光物质 最大吸收光 最大发射光谱 应用 谱 异硫氰酸荧光素 490～495nm 520～530nm FAT、荧光偏振免疫测 (FITC) （应用最广 （黄绿色） 定 泛 ） 四乙基罗丹明 570～575nm 595 ～600nm （橙 FITC的衬比染色或双标 (RB200) 红色） 记FAT 四甲基异硫氰酸罗 550nm 620nm （橙红色） FITC的衬比染色或双标 丹明 (TRITC) 记FAT (淬灭速度慢) 藻红蛋白 （PE ） 565nm 578nm （红色） 双标记FAT、流式细胞 术，可与FITC共用 488nm激发光 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 荧光抗体技术的基本原理 荧光素标记抗体与切片中组织/细胞抗原反 应，洗涤分离后荧光显微镜观察呈现特异荧光 的抗原抗体复合物及其部位，对组织细胞抗原 进行定性和定位检测，或对 自身抗体进行定性 和滴度测定。 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 荧光抗体技术的内容 u 荧光抗体制备 （略 ） u 标本制作 u 荧光抗体染色 u 荧光显微镜检查 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 荧光抗体的保存 v-20℃：保存1～2年 v真空干燥：长期保存