卡那霉素在植物转基因中的应用及其抗性基因的生物安全性评价3.PDF

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 23 卷第 6 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003 年 6 月 卡那霉素在植物转基因中的应用及 其抗性基因的生物安全性评价 王紫萱 　易自力 (湖南农业大学细胞工程重点实验室 　长沙 　410128) 摘要 　介绍了卡那霉素在转基因植物筛选中的作用机理及其在植物转化过程和转化后代中的应 用现状 。卡那霉素不仅在植物转化过程中可起到筛选作用 ,而且在转化后代中可通过其对后代 进行遗传分析和测定种子纯度 , 同时还可用于后代田间成株的筛选 。随着卡那霉素的广泛使用 , 卡那霉素抗性基因的安全性问题 日益受到重视 。概述了转基因植物的杂草化 、卡那霉素抗性基 因的水平扩散 、抗生素医疗安全性和食用安全性等方面的研究进展 。 关键词 　卡那霉素 　转基因植物 　生物安全性 　　转基因植物中的外源基因主要有两大类 , 即目 的影响 ,能正常生长 、发育、分化 ,从而把转化体筛 的基因和标记基因。标记基因是帮助对转基因生 选出来 。 物工程体进行筛选和鉴定的一类外源基因 ,它包括 卡那霉素能对转基因植物进行筛选实质上是通 选择标记基因和报告基因[ 1] 。在选择压力下 ,不含 过卡那霉素抗性基 因起作用 的。卡那霉素抗性 标记基因及其产物的非转化细胞和组织死亡 ,而转 ( r ) ( ) Kan 基因即新霉素磷酸转移酶基因 np t Ⅱ,亦可 化细胞由于有抗性 ,可以继续存活 , 因而有利于从 ( ) 称为氨基糖苷磷酸转移酶 Ⅱ基因 ap h Ⅱ,它来自大 大量的非转化细胞和组织中选择出转化克隆[ 1 ,2 ] 。 ( ) 肠杆菌 E . coli 的 ap hA 2 基因。是 目前在植物基因 目前 ,在植物转基因中使用的筛选剂主要有抗 转化中应用最广泛的选择标记基因。它编码的产物 生素类 ,除草剂类 ,氨甲喋呤 ,氨基酸类 。在抗生素 ( ( ) ) 氨基糖苷磷酸转移酶 APH 3′Ⅱ—酶 能对氨基糖苷 ( ) [3 ] 类中 , 主要有卡那霉素 kanamycin , Kan 、潮霉素 类抗生素 ———卡那霉素具有抗性 。此酶最早是从 ( ) ( ) hygromycin ,Hyg ,庆大霉素衍生物 geneticin , G4 18 细菌转座子 Tn 5 中分离得到的,它的作用原理是 : 等 ,其中卡那霉素在植物的遗传转化中是应用最早 np t Ⅱ基因产物通过酶促磷酸化使氨基糖苷类抗生 最广泛的一种筛选剂 。因此其筛选效果和抗性基 素失效 ,从而解除毒性 。因为卡那霉素能干扰一般 因的生物安全性问题受到了人们的普遍关注 。 植物细胞叶绿体及线粒体的蛋白质合成 , 引起植物 1 　卡那霉素的作用机理 绿色器官的黄化 ,最终导致植物细胞的死亡 。而转