《细菌的生长和遗传变异2》课件.ppt

考试6 1.X、γ射线的杀菌机理是什么？ 2.氧化剂的杀菌机理是什么？ 3.福尔马林的主要成分是什么？ 4.乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓度是多少？ 5.青霉素的抗菌机理是什么？ 6.直接计数法的特点是什么？有哪些具体方法？ 4．比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 （1）制标准曲线（OD~No） （2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量 （二）间接计数法(活菌计数法) 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？ 繁殖 提问：细菌繁殖的可见现象是什么？ 产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养） 计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢 分固体培养法和液体培养法 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 2.稀释液体计数法 特点：液体培养、统计学查表计数 又称MPN法 （或最可能数法） Most Probable Number 例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量 提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？ 一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱） (4)统计－查表－计算 根据不同稀释度变黑试管 ①统计出数量指标 三位数及其中最低稀释度 （取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数后两位数） 提问：上例情况而言统计数量是几？ ②查表 表——MPN表 MPN三管法测数统计表 3.薄膜计数法 薄膜——微孔滤膜（φ0.45um） （3）统计计数 提问：假如 测出250个菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？ 250÷50ml=5个/ml自来水 样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品的体积数 (三)重量法 提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？ 已知单个细菌的平均重量 除法计算 细菌的湿重量＝10-15~10-11g/个细胞 干重约为湿重的10％~20％。 1. 干重法 悬浮物＝无机物+有机物（包括细菌） 提问：如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？ 高温(550℃)灼烧 （1）悬浮物中绝大多数为细菌时 细胞数目=MLSS÷个体细菌的平均干重量 （2）除细菌外还有大量无机悬浮物时 W无 MLVSS挥发性悬浮物＝MLSS － W无 =细菌群体的干重量 细胞数目= MLVSS÷个体细菌的平均干重量 （3）有大量非细菌有机悬浮物时 提问：如何测定呢？ 不能用重量法，应改用其他方法。 总体来说重量法方法误差较大，一般只作为菌数粗略估算 如活性污泥测定（以重量MLSS、MLVSS间接表示细菌数量） 2.细胞含N量法 大多数生物包括细菌，细胞内的蛋白质氮含量比较稳定，一般为蛋白质干重15％~16％，平均为16％。 ＊还需要测定哪些条件可以由以上比例确定菌样中细菌浓度？ 如何试验操作及计算呢？ 3.DNA含量法 同种细菌的DNA含量一致,可通过测定DNA的含量来表示细菌的生长量 (四)其它生理生化指标法 提问：当你需要测定某水样中细菌数量时，你该如何选择方法？ 二、细菌的生长特性 “生、老、病、死” （根据投食方式）分间歇式培养（分批培养）、连续式培养两种情况 1.间歇培养 提问：如何人工进行细菌间歇培养？ 只有开始时的一次性投料和接种细菌（其余时间细菌根据环境变化自行生灭） （1）活细菌重量变化曲线 ①增长速率上升阶段 提问：为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不断增大？ A.营养物丰富，细菌增殖；B.细菌在细胞内以糖原、油滴等形式储存营养物，细菌个体重量增大 ②增长速率下降阶段 提问：为什么增长速率较前下降了？ ③内源呼吸及死亡阶段 ———内源呼吸+毒物浓度更高 （个体）瘦→死 （群体）死亡率大于出生率 从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。 提问：此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？ 不是，利用死亡细菌的残体营养 * * 细菌不完全透光，一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比 浊度仪或721分光光度仪 无菌水 1. 稀释平板计数法—固体培养法 第一步：菌样巧妙稀释 得到不同稀释度 （10-x）菌液 菌样被无菌水不同稀释倍率后平板培养图 10 - 2 10 -3 10 -4 10 -5 各取1ml，均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却