流式细胞仪FLOWCYTOMETER原理及应用.PDF

流式细胞仪流式细胞仪 FLOW CYTOMETER 原理及应用 EPICS XL 流式细胞分析仪 流式细胞术 流式细胞仪是近代细胞生物学、分子生物学、 分子免疫学和单克隆抗体技术、激光技术、电子计 算机技术等学科高度发展、综合的结晶。 FCM应用标志着细胞学、肿瘤学、免疫学等进 入了细胞和分子水平的研究, 流式细胞仪与显微镜 FLOW MICROSCOPE 光源 激光 自然光、灯光、氙(汞)灯 对象 细胞、生物粒子 细胞、生物粒子 承载工具 鞘液及流动室 载(盖)玻片 检测信号 光学信号 形态及染色 放大方式放大方式 PMTPMT ，，放大电路放大电路 目镜目镜XX物镜物镜, 光学放大光学放大 统计 计算机，5000 人工，200 结果 多参数，综合分析 简单，单参数 基本原基本原理 流路 流动室 鞘液SHEATH 5 6 样本流样本流SAMPLE 单细胞悬液单细胞悬液5*10 ~1*10 个个//ml 光路 光源光源 滤片 光电倍增管PMT HV 电路 放大电路HV及GAIN 增益 A//D转换转换 统计：计算机 流流 路路 单细胞悬液 大多数仪器是在50-300 µm 大小的孔径中,将细 胞悬液注射进入鞘液中 这一过程,成为流体动力学聚焦 FLOW CELL Injector Tip ShSheathth fluid FluorescenceFluorescence signals Focused laser beam 光 路 光源 检测信号 散射光信号 FSFS: 前向角散射光前向角散射光 SS: 侧向角散射光(90度散射光) 荧光信号 荧光染料荧光染料 光学滤片 光光 路路 光源 与通过的细胞聚焦在同一点上 激光 空冷空冷 488nm blue, 633nm red, 325nm UV, 514nm green, 空冷冷/水冷