绿木霉ZY-01中纤维素酶EGⅣ基因的克隆及其在E-武汉科技大学学报.PDF

第 卷第 期 武 汉 科 技 大 学 学 报 , 39 2 Vol.39No.2 年 月 2016 4 JournalofWuhanUniversitofScienceandTechnolo Ar.2016 y gy p 췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍 绿木霉ZY-01中纤维素酶EGⅣ基因的克隆 及其在E.coli中的原核表达 , , , , , 胡 侨 罗 伟 阮 涛 侯亚利 黄 皓 杨忠华 ( , , ) 武汉科技大学化学工程与技术学院 湖北 武汉 430081 : , 摘要 以前期筛选到的纤维素酶高产菌株绿木霉T.virideZY-01的总RNA为模板 利用RT-PCR技术克隆 , , ( ) 。 出内切葡聚糖酶 EGⅣ基因 连接至 pET-28a构建出重组质粒 并转化至E.coliBL21DE3中表达 该 EGⅣ基 , , 。 因约有 1089bp在启动子 T7lac的控制和 IPTG的诱导下 目的基因成功地在原核细胞中表达 通过 SDS- , / , 、 检测得出目标蛋白分子量为 重组酶的比酶活为 该酶最适 值为 最适反应温 PAGE 39kDa 1.05U mg pH 6 度为50℃。 : ; ; ; ; ; 关键词 绿色木霉 纤维素酶 内切葡聚糖酶 EGⅣ基因 基因重组 原核表达 中图分类号: 文献标志码: 文章编号: ( ) Q786 A 1674-3644201602-0156-05 、 ( ) 纤维素是自然界中最丰富 最廉价的有机可 酶链反应 RT-PCR方法从本实验室前期筛选出 , , 再生资源 而纤维素酶是生物转化纤维素过程中 的绿木霉T.virideZY-01中克隆 EGⅣ基因 并 , 、 ( ) 的一类复合酶 主要由内切葡聚糖酶 EG 外切葡 将其转化到大肠杆菌 BL21DE3中进行原核表 , , , 聚糖酶 和 葡糖苷酶 等组成 其中 达 从而为构建高效纤