敲除aceE基因对大肠杆菌生长和丙酮酸代谢的影响.PDFVIP

第１１卷第６期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ．１１Ｎｏ．６ ２０１３年１１月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｎｏｖ． ２０１３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１３．０６．００３ 敲除ａｃｅＥ基因对大肠杆菌生长和丙酮酸代谢的影响 宋灿辉，张伟国 （江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 ２１４１２２） 摘　 要：大肠杆菌ａｃｅＥ基因是编码丙酮酸脱氢酶多酶复合体ＰｄｈＲ的关键酶之一。 利用Ｒｅｄ重组系统敲除大肠杆 菌ＭＧ１６５５ 的ａｃｅＥ基因后，阻断了丙酮酸流向ＴＣＡ循环，导致丙酮酸的累积，也使菌体生长受到影响，在培养基中 补加５ ｇ／ Ｌ ＫＡｃ后可以在一定程度上弥补菌株在生长上的缺陷。 摇瓶发酵３６ ｈ，ＭＧ１６５５ 没有积累丙酮酸， ＭＧ１６５５ΔａｃｅＥ∷ｃａｔ 菌株可以积累２６７７ ｇ／ Ｌ 丙酮酸，为利用大肠杆菌发酵生产丙酮酸奠定了基础。 关键词：ａｃｅＥ；大肠杆菌；丙酮酸；Ｒｅｄ重组 中图分类号：Ｑ８１４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１３）０６－００１５－０４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｃｅＥ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｏｎ ｇｒｏｗｉｎｇ ａｎｄ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆＥ．ｃｏｌｉ ＳＯＮＧ Ｃａｎｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ Ｗｅｉｇｕｏ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｊｉａｎｇｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４１２２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｅｎｅａｃｅＥ ｅｎｃｏｄｉｎｇｗａｓｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｋｅｙ ｅｎｚｙｍｅｓｏｆ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ． Ｕｓｉｎｇ Ｒｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｃｅＥ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉ ＭＧ１６５５ ｗａｓ ｋｎｏｃｋｏｕｔｅｄ ｔｏ ｂｌｏｃｋ ｔｈｅ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｆｌｏｗ ＴＣＡ ｃｙｃｌｅ，ｃａｕｓｉｎｇ ｐｙｒｕｖａｔｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ５ ｇ／ Ｌ ＫＯＡｃ ｃｏｕｌｄ ｍａｋｅ ｕｐ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｄｅｆｅｃｔ ｔｏ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｘｔｅｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ．ＭＧ１６５５ΔａｃｅＥ ∷ｃａｔ ｉｎ ｓｈａｋｅ ｆｌａｓｋ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ３６ ｈ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｗｉｔｈ ２６７７ ｇ／ Ｌ，ｉｎｉｔｉａｌ ｓｔｒａｉｎ ＭＧ１６５５ ｄｉｄ ｎｏｔ ｐｒｏｄｕｃｅ ｐｙｒｕｖａｔｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｃｅＥ；Ｅ．ｃｏｌｉ；ｐｙｒｕｖａｔｅ；Ｒｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ 　 　 丙酮酸是一种重要的有机中间体，在化工、制 氢酶（Ｅ１ｐ）、二氢硫辛酰转乙酰基酶（Ｅ２ｐ）和二氢 药和农用化学品等工业及科学研究中有着广泛的 硫辛酸脱氢酶（Ｅ３）。 其中，ａｃｅＥ、ａｃｅＦ和ｌｐｄＡ分别 ［１］ ［３］ 用途 。 丙酮酸是机体代谢的中间产物，处于糖酵 编码这３ 种蛋白 。 当敲除ａｃｅＥ 后，ＰＤＨ 失去将 解途径的末端，同时又连接着己糖磷酸途径（ＥＭＰ） 丙酮酸转化为乙酰ＣｏＡ 的能力，中心代谢途径因为 和三羟酸循环（ＴＣＡ），处于代谢途径中的关键代谢