分子生物学实验2015年.pptVIP

2.低熔点琼脂糖 传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法现在用的人已经不多了。 以前经费紧张，低熔点琼脂糖贵，比较经济方法就是常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔点琼脂糖区域再切出来，这样就非常节约了。 二、实验目的 1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收DNA。 2.回收目的基因片段为下步连接反应作准备 仪器及耗材：天平、台式离心机、微量移液器及吸头、EP管。 材 料： 含有目的基因酶切产物的凝胶块 试 剂： AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 ；无水乙醇； 三、实验仪器、材料和试剂 四、实验步骤 1. 凝胶称重（提前记录 1.5 ml 离心管重量），按照1：3加入 BufferDE-A（如 100 mg凝胶加入300 μl DE-A Buffer,100mg=300ul）。 2. 于 75oC加热，间断混合（每 2-3 min），直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min）。 3. 融化后，加0.5个bufferDE-A体积的bufferDE-B，混合均匀。 4. 将回收柱放置于收集管上，溶解的凝胶加入到回收柱中，12 000 g, 室温离心1 min; 5.将