第二十章 免疫检验自动化仪器分析(二).ppt

仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入AMPPD发光剂 信号检测 时间分辨荧光免疫分析仪是用镧系元素标记抗原或抗体作为示踪物，与时间分辨测定技术结合而制造出来的一种自动化分析仪。荧光偏振免疫测定是一种均相荧光免疫测定法，常采用抗原抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。 全自动酶联免疫分析仪是由多个模块组成，用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、酶标板读数和结果打印自动化。其结果是减轻了劳动强度，缩短了试验时间，提高了工作效率，为全面实现实验室自动化打下了基础。 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 电化学发光反应 光信号检测 检测完毕 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。 （二）仪器测定技术要点 　⒈ 抗原抗体结合 　⒉ 加入Eu3+螯合抗体 　⒊ 加入酸性增强液 　4. 信号检测 增强液(enhancement solution)，使Eu3+抗体－抗原复合物的PH值降低至2~3，以利于Eu3+从复合物上完全解离下来，游离的Eu3+为增强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强液中的β-二酮体生成一个Eu3+在其内部的保护性胶态分子团，这是一个新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧光，信号的增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于Eu3+与抗体标记，后一种用于与解离下来的Eu3+螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为解离增强镧系元素荧光免疫(dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay, DELFIA) 　 　1. TRFIA分析用的酸性增强液易受环境、试剂、容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试剂和器材应尽量防尘。 　2.TRFIA分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，应选择应用。 　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 　1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的特性等因素。 　2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预处理，除去干扰成分。 　5.液路系统 　6.洗板系统 　7. 酶标板读数仪 　8.自动装载传递系统 　9. 计算机管理和信息系统 全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作速度快，自动化程度高，适合大批量样本的处理，如血站系统。 分体机，由于它有一个独立的全自动样本处理站，加样速度快，适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实验室。 常用英语单词 Reagent :试剂 Sample：标本 Calibration：校准，定标 Maintenance：维修，保养 Alarm:报警 Rack：试管架 1. 什么是免疫检验自动化？应用哪些技术？优点是什么？ 2. 免疫浊度分析的原理是什么？有哪些临床应用？ 3. 免疫胶乳比浊法和免疫散射比浊法的原理是什么？ 4. 定时散射比浊法和速率散射比浊法的测定原理，其抗原过量检测有什么不同点？ 5. 免疫比浊分析的影响因素有哪些？ 6. 吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪技术要点是什么？ 7. 酶联发光免疫分析仪的原理，有哪几种类型？各有什么特点？ 8. 电化学发光免疫分析仪测定的技术要点是什么？ 9. 时间分辨荧光免疫分析仪测定的技术要点是什么？注意事项有哪些？ 10. 全自动酶免分析仪的组成成分有哪些？优点是什么？ 免疫检验自动化是将免疫检验过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和仪器清洗等步骤由计算机控制，仪器自动化进行。 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，在抗原抗体反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动大，所获取的信号不稳定，定时散射比浊法避开这一阶段，专门测定抗原抗体反应的最佳时段，使检测误差降到最低。 吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直接标记抗体或抗原，以磁性微粒为固相载体的一种免疫分析法，吖啶酯发光只需加入氧化剂和pH纠正液，不需要酶催化。 酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或荧光反应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后，加入底物(发光剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光信号的强弱来进行定量。 （二）仪器评价 采用流水线式操作 加样