微生物药物发酵菌种基因工程改造.ppt

* 3. 泰乐菌素——弗氏链霉菌（Streptomyces fradiae） 治疗和预防畜禽支原体感染首选药物。 * * 4. 螺旋霉素（Streptomyces ambofaciens 或Streptomyces spiramyceticus） 治疗由革兰氏阳性菌和某些革兰阴性菌引起的耳、鼻、喉和呼吸道感染。 化学半合成乙酰螺旋霉素的亲脂性增加，治疗效果优于螺旋霉素。 * 螺旋霉素链霉菌：螺旋霉素 耐热链霉菌：碳霉素 螺旋霉素链霉菌：必特螺旋霉素（异戊酰螺旋霉素） R=H 异戊酰螺旋霉素I R＝COCH3 异戊酰螺旋霉素II R＝COCH2CH3 异戊酰螺旋霉素III ? ? 必特螺旋霉素基因工程菌的构建 * 5. 那他霉素——那他链霉菌（Streptomyces natalensis等） 广泛用于食品防腐保鲜以及抗真菌治疗。 * * * 6. GHS（谷胱甘肽）——酿酒酵母等 基因工程技术增加谷胱甘肽生物合成相关酶基因的拷贝数。 * 7.青蒿素——植物抗疟药 * 青蒿素合成生物学——药物生物技术最新发展阶段 美国加州大学Keasling将来源于不同生物的基因进行设计和组装，在酵母工程菌中建立了一条非天然的代谢途径，大量合成抗疟疾药青蒿素前体——青蒿酸。 利用酵母天然的甲羟戊酸途径，该途径在正常情况下通过糖类代谢产生乙酰辅酶A来合成甾醇。 甲羟戊酸途径被用来大量产生中间体法尼焦磷酸盐(FPP)，而法尼焦磷酸盐接下来可被在酵母中表达来源于高等植物的青蒿素合成酶(ADS)和新型细胞色素P450单加氧酶基因(CYP71AV1)，催化产生青蒿酸。 这一工作的难度在于对来自酵母、青蒿多种基因及其代谢途径的组装与精密调控。 Keasling协助建立了Amyris生物技术公司，用合成生物学技术进行抗疟疾药的生产。 绿色、保护资源。 * 找菌种 找基因 被动筛选 主动创新 利用自然菌种 人工设计产生菌 诱变育种 基因工程育种 * 诱变育种与基因工程育种是一种互相补充的关系。 诱变育种也有理性化的一面。诱变获得的高产菌株与野生菌株的对比分析，可为基因工程育种提供研究线索。 基因工程育种也有不确定的因素。 哪种育种策略对工业发酵菌株有效，实践了才知道！ * * 致谢： 刘文（中科院上海有机所），覃重军（中科院上海植生所），张立新（中科院微生物所），王以光（医科院药生所），李永泉（浙江大学）等。 本幻灯片引用了以上专家学者等课题组的研究结果。 * * * 微生物药物发酵菌种的基因工程改造 * 微生物发酵产物——基本概念 （1）发酵 （2）初级代谢产物 （3）次级代谢产物 * 发酵：借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动，制备微生物菌体本身、初级代谢产物或次级代谢产物的过程。 （狭义概念：在无氧等外源氢受体的条件下，底物脱氢后所产生的还原力[H]未经呼吸链传递而直接交某一内源性中间代谢物接受，以实现底物水平磷酸化产能的一类生物氧化反应） 初级代谢产物：微生物生长必需的物质；各种微生物共有的产物。例如氨基酸、核苷酸和维生素等。 次级代谢产物：与微生物生长繁殖无关的代谢产物，由初级代谢产物衍生而来。例如抗生素。 * 初级代谢产物——乙醇 * 微生物初级代谢产物 有机酸：乙酸，乳酸，柠檬酸等； 醇类：乙醇，丁醇，甘油等； 氨基酸及多肽：谷氨酸，赖氨酸，GSH等； 核苷酸：ATP等； 多糖：葡聚糖，透明质酸，黄原胶等； 脂类：长链脂肪酸等； 维生素： 维生素C等。 * 糖酵解途径 初级代谢产物主要是通过糖酵解、磷酸戊糖途径和三羧酸循环等中心代谢途径合成 * 三羧酸循环途径 * 戊糖磷酸途径 * 相互关联的初级代谢途径 * 聚酮类：大环内酯类抗生素（红霉素）、蒽环类抗生素（道诺霉素）等；雷帕霉素（免疫抑制剂），阿维菌素（农用杀虫剂）等。 氨基酸类：多肽类抗生素（青霉素）等； 环多醇和氨基环多醇：氨基糖苷类抗生素（链霉素） ； 多糖：阿卡波糖； 萜类：赤霉素； 核苷类：嘌呤霉素等。 许多微生物药物结构复杂，是不同多种结构类型的复合物。 一、微生物次级代谢产物与微生物药物 * 微生物次级代谢产物生物合成特点 特定菌种（株）产生的代谢产物； 特定菌种（株）特定生长阶段的产物； 特定菌种（株）特定生长阶段可能会产生多种结构类型的次级代谢产物； 同一种次级代谢产物一般为多组分混合物。 合成酶对底物的特异性要求不高； 合成酶对底物的作用不完全； 同一种底物可以被多种合成酶催化。 * 初级代谢产物与次级代谢产物的生物合成关系 初级代谢产物是次级代谢产物生物合成的前