液相色谱质谱分析课件.pptVIP

分离原理 K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关 固定相极性流动相极性 正相分配色谱 组分极性越大，保留时间越长 反相分配色谱 固定相极性流动相极性 组分极性越小，保留时间越长 （2）分类 四、 色谱分离方法的选择 五、质谱仪 1. 质谱分析法 2. 质谱仪的结构及工作原理 3. 质谱图及离子峰的主要类型 质谱分析法（Mass Spectrometry, MS）是在高真空系统中测定样品的分子离子及碎片离子质量，以确定样品相对分子质量及分子结构的方法。化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及碎片离子，按照其质量m和电荷z的比值m/z（质荷比）大小依次排列而被记录下来的图谱，称为质谱。 1. 质谱分析法 根据质谱峰的质荷比测定化合物的分子量，推测分子式及结构式 根据峰强度进行定量分析 2.质谱仪的结构 （1） 进样系统 作用：将样品分子引入到离子源中。 ? 蠕动泵连续进样 ?六通阀直接进样 ? 色谱进样系统 方式： (2) 离子源 作用： 1. 将导入质谱仪系统的样品去溶剂化 2. 将离子源处的大气压与质谱仪系统一级 真空阻隔开 3. 被分析物离子化或将溶剂中的离子转化 成气相 4. 去除中性物质和带反极性电荷离子，否 则会对分析产生干扰 电喷雾电离源(ESI) ?多电荷离子 ?测定的样品分子量大 液相色谱质谱分析 一、 液相色谱概述 二、 HPLC仪器构成 三、高效液相色谱法的类型及分离机理 四、色谱分离方法的选择 五、质谱仪 主要内容 一、 概 述 高效液相色谱（HPLC）是一种以液体为流 动相的快速分离分析色谱技术。具有高压、高速、 高效、高灵敏度的特点，对于那些沸点高，热稳 定性差，相对分子质量大的有机化合物如烷烃、 烯烃、芳烃、染料、蛋白质、氨基酸、核酸等均 可进行分离分析。 1 、高效液相色谱 1）高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达 10cm3·min-1. 2）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。 高效液相色谱的优点 2 、液相色谱仪器（high performance liquid chromatograph） 液相色谱仪（1） 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） LCQ Deca XP MAX液相色谱质谱联用仪 二、 HPLC仪器构成 1 、流程 2 、 HPLC仪器组成： 高压输液装置 →进样系统 →分离系统→ 检测系统 高压输液系统 (1) 贮液器 用来供给足够数量的合乎要求的流动相以完成分析工作。 材质：玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料聚醚醚酮（PEEK） 容积：0.5～2.0L 放置位置：高于泵体，保持一定的输液静压差 注意：密封、过滤 流动相过滤与脱气装置 流动相过滤装置 分为在线过滤和真空过滤 流动相脱气装置 分为在线真空脱气和超声波脱气 泵体材料耐腐蚀 泵腔的体积要小，以便快速更换溶剂 能在高压下连续工作,耐压40-50MPa. cm2 压力平稳，无脉冲 高压输液泵 输出流量稳定，重复性高,输出流量范围宽 (2) 高压输液泵 梯度淋洗装置 (内梯度) (外梯度) 梯度淋洗装置 等度洗脱与梯度洗脱 梯度洗脱的特点 ?改善分离, 加快分析速度； ?改善峰形, 减少拖尾; ?可能引起基线漂移 分配比变化范围宽的 复杂样品应采取 梯度洗脱方式分离 1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 2) 适用于所选择的检测器。 3) 化学惰性好，以免破坏固定相。 4) 低粘度，增