《外文翻译--胁迫条件下烟草中病毒诱导两个脯氨酸物合成途径基因沉默的分析》毕业学术论文.docVIP

齐齐哈尔大学毕业设计（论文） PAGE PAGE I 齐 齐 哈 尔 大 学 外文翻译 题 目 胁迫条件下烟草中病毒诱导两个脯氨酸物合成途径基因 沉默的分析 学 院 　生命科学与农林学院 专业班级 　生物技术081 　 学生姓名 　 指导教师 　 2012 年 6 月 10 日 摘 要 在许多植物中，游离脯氨酸积累是对植物在胁迫条件下的应答。为了区分两种不 同的脯氨酸生物合成途径， ，我们运用病毒诱导基因沉默（VIGS）系统来抑制羧 酸合成酶基因（P5CS;EC:1.5.1.12）和鸟氨酸氨基转移酶（OAT;EC 2.6.1.13）的基因。将经过VIGS处理的烟草圆叶分别在干旱、脱落酸（AB A）、聚乙二醇（PEG）条件下培养。将上述经过处理的叶片进行mRNA、叶绿素、 脯氨酸以及多胺水平的检测。在干旱胁迫或者聚乙二醇处理条件下，P5CS沉默处理的植物中大多数脯氨酸的合成都受到了抑制。OAT沉默处理的植物中仅有一小部分脯氨酸的积累在干旱条件下受到限制，而聚乙二醇对脯氨酸的积累没有影响。在ABA处理条件下，P5CS沉默处理的植物中的脯氨酸积累完全受到抑制，而对OAT沉默处理的植物中脯氨酸积累没有影响。PEG处理条件下，叶绿素含量的减少促进了P5CS沉默处理的植物的生长，但使OAT沉默处理的植物生长延缓。在ABA处理条件下，叶绿素的减少对这两种植物没有影响。在PEG条件下，多胺的水平的增加对P5CS沉默处理的植物的生长没有影响，但使OAT沉默处理的植物生长加快。在ABA条件下，多胺水平的增加对P5CS沉默处理的植物的生长没有影响，但OAT沉默处理的植物生长一段时间后多胺的水平被提升了。因此，P5CS对干旱胁迫、PEG、ABA条件下脯氨酸的积累起到主要作用。OAT在干旱和PEG条件中起到了次要作用，但并不参与ABA调节。在PEG和ABA条件下，OAT表现出了与多胺水平调节具有密切的联系。 关键词：烟草 病毒诱导 基因沉默 第１章　引 言 在植物对于水分缺乏的应答当中经常会出现脯氨酸积累这一现象，脯氨酸的积累经常是伴随着渗透调节而出现的。在渗透调节中，脯氨酸会起到重要的渗压作用，例如稳定蛋白质结构、维持细胞潜在的氧化还原能力以及清除具有氧化活性的物种。脯氨酸在调控植物中有两种方式：第一种是通过P5CS进行谷胱甘肽的转化；另一种是通过OAT进行鸟氨酸的转化。在许多植物当中，这两种途径都独自或者同时参与胁迫诱导条件下脯氨酸的积累过程。另外，P5CS和OAT编码基因的上调表达已经通过许多研究得以证实。然而，这两种方式在脯氨酸积累过程中的参与程度尚未有结果。对于它们之间是否可以进行互补也不得而知。因此，本实验的目的是为了研究在干旱、脱落酸（ABA）、或者聚乙二醇（PEG）条件下P5CS和OAT在诱导脯氨酸积累过程中所起的作用。 病毒诱导基因沉默（VIGS）是研究基因功能的反向遗传学的常用工具。根据RNA干涉过程，在一段特定的序列中，VIGS可以定位病毒侵染的RNA。在病毒侵染应答中，小干扰RNA（siRNA）被扩增。这种扩增的机理是由于被侵染的植物以及含有的RNA侵染沉默复合体通过定位和减少mRNA对siRNA进行补充。当上述的病毒被扩增并且从侵染区域传播到新的生长区域中，引起了被侵染植物的基因沉默，植物基因中的mRNA中的局部序列也受到了侵染病毒的嵌入并受到侵害，导致了基因表达的沉默。因为VIGS可以利用短暂的表达并且能够在未进行基因转换的成熟植物中得以应用，VIGS已经成为了研究功能基因组学的常用方法。例如，存在于植物的生长发育、病原体抑制、抗逆境以及衰老中的很多基因都可以通过这种方法定性。此外，VIGS可以应用于单基因或者基因家族中的多个基因的沉默，这样就能克服功能的冗余现象。这里，我们介绍一种VIGS系统的应用，这种系统用来使P5CS和OAT的脯氨酸合成沉默。经过胁迫处理的系统用来研究氨基酸积累中，两种脯氨酸合成途径的作用。另外，通过叶绿素含量的改变研究在胁迫条件下，这些基因沉默植物的损害程度。从以往的研究表明：在胁迫条件下，多胺水平的的增加在植物保护中起到重要作用，鸟氨酸的产生不仅是由于脯氨酸合成途径，同时也包括多胺的合成，在胁迫处理下多胺的含量也受到调控。 第２章　材料和方法 2.1 植物材料、栽培以及圆叶的准备 烟草生长在一个含有蛭石，珍珠岩和有机物质呈1:1:2关系的0.3L的容器内，室温25℃、在