云大 发酵工程实验结果以及分析课件.pptVIP

分析讨论 由实验结果可以看出产酸量是随着时间增加而增加的，柠檬酸不断地积累；但是由于测量过程中存在误差，故还原糖含量并不是一直递减，PH不停降低最后稳定在1.5 生物技术专业系统实验 发酵工程实验 石秋晓 （50%） 田 爽 （50%） 星期一 上午 第 三组 实验一 发酵工程实验总体介绍和安全知识 思考题 1.请设计从土壤中筛选谷氨酸产生菌的实验方案。 要求：从培养基配方设计说明，初筛、复筛等操作步骤，产物检测确认方法，用到的实验器材等几方面设计实验。 答：在已报到的谷氨酸生产菌中，除芽孢杆菌外，它们都有一些共同特点。革兰氏阳性，菌体为球形，短杆至棒状，不形成芽孢。没有鞭毛，不能运动。需要生物素作为生长因子，在通气条件下才能产生谷氨酸。 实验器材：铁铲，三角瓶，试管，吸管，培养皿，摇床，发酵罐，高压灭菌锅，牛皮纸袋，量筒，酒精灯，涂布器，接种针。 选择培养基：琥珀酸钠2g，磷酸氢二钠1.6g，7水硫酸镁0.6g，脲5g，生物素30微克，硫酸铁和硫酸锰各2mg，水1.0L，pH7.0~7.2 初筛培养基：葡萄糖 12%，玉米浆0.8%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.04%。pH7.0 复筛培养基：葡萄糖18%，玉米浆0.5%，甘蔗糖蜜0.15%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.04%，pH7.0 实验步骤：a.产谷氨酸菌为细菌，则采集田园土为好，做土壤浸出液，有限稀释并牛肉膏蛋白胨培养基平板涂布培养，依据菌落特征挑出产谷氨酸菌，斜面纯化培养（也可直接用选择培养基选择出产谷氨酸菌）b.初筛:上面纯化的菌株有多种，每株两瓶分三批进行初筛。放瓶后，测定谷氨酸含量。从中选出产量较高的6株左右，摇瓶培养。c.复筛：经初筛选出的6株，继续进行摇瓶复筛实验，发酵周期46h，以生产菌作为对照，共进行了3次对比试验，选出产谷氨酸最高的两株。d.发酵罐发酵，并检测产物。方法有：从发酵液中提取谷氨酸一般用等电点法，离子交换法，金属盐沉淀，盐酸盐法和电渗析法。菌体鉴别用革兰氏染色法（培养基同复筛） 实验二 柠檬酸产生菌的分离及筛选 1.察氏-加酸培养基上菌落生长情况 实验结果 2.察氏-多民培养基上菌落生长情况（产酸情况） 1.黑曲霉柠檬酸产生菌菌株富集应考虑利用哪些特征来进行富集？ 答：a.温度，培养温度应适宜其生长 b.培养条件适宜，C源的利用，对其他菌有筛选效果 c.pH，因黑曲霉耐酸性很高，因此可以利用低pH的培养基，来排除杂菌污染，并纯化富集。 d.利用固体点植在察氏-多民培养基上纯种筛选富集。 2.观察记录在察氏-加酸培养基上菌落生长情况。 答：见实验结果1 3.观察记录所挑选察氏-多民培养基平板上变色圈和菌落直径比值 答：见实验结果2 思考题 实验三 柠檬酸产生菌的初筛及产物  定性、定量检测 实验结果 1.摇瓶发酵实验现象 单位：cm 编号 现象 自 溶液中有小球状菌粒，液体之上的瓶壁有黑色孢子粒，有白色菌膜。 2112 溶液中有小球状菌粒，较“自”略小，液体表面一层白色菌膜。 2.发酵产物定量测定结果（NaOH溶液滴定起始刻度均为0.00） 3.柠檬酸的定性检测结果 a.点样时 自 应点14下，2112应该点5下 b.设溶质的最高浓度中心至原点中心距离为d，溶剂前沿至原点中心的距离为L 图中编号“自”在本组实验中没有出现最高浓度斑，借鉴的其他组的 c.实际比例图 1.实验结果1中，有菌膜是因为药瓶培养时间过长造成的；菌粒为小球状则可能与摇瓶时流体作用有关，球状有较大的表体比，便于利用营养，其状态与固体培养基不同；编号“自”产生黑色孢子是因为摇瓶时一部分瓶壁处于时液时固状态，故能是黑曲霉产生孢子。 2.实验结果2，滴定时应注意溶液颜色变色后深浅统一，本次实验中，同一样液消耗的氢氧化钠溶液差异稍大，可能是滴定时的误差，结果颜色深浅度不同。产酸量与开始时接种菌种有明显关系。 3.实验结果3分析：点样次数是按与标准酸液算出的比例。此次求得 值比理论 值要大，尤其是苹果酸和柠檬酸，造成这一结果的原因可能是：展开剂配比不准确，使极性偏大，人为取样存在误差；环境温度也会对其造成影响，应控制温度在合适值，保持恒定；还有可能薄层厚度存在轻微差异，不均也会影响结果；样品的用量也会造成值得改变，样品太少，斑点不清楚，无法观察测量，量太多，出现斑点太大或拖尾，不易分开，并且两者均给测量带来一定困难，很容易出现误差。编号“自”未出现最高浓度中心及斑点，原因可能是样液太稀，点样次数不够，点样次数较多可能造成斑点直径过大，展开时，部分没入展开剂中，而溶于其中，造成样液流失，还有可能点样时刺破薄层，造成一定损失。 分析讨论 1、绘制层析图并计算各样品的Rf值