动物、矿物药分析课件.ppt

* 三、蟾酥的质量分析 蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider的耳下腺及皮肤腺的干燥分泌物，具解毒、止痛、开窍醒神之功效，是中成药六神丸、痧药丸、牛黄消炎丸等的组成药物之一。 蟾酥的化学成分复杂，主要成分有强心甾体类、吲哚碱类、甾醇类以及肾上腺素、多糖、蛋白质、氨基酸、有机酸等。 * 1．强心甾体类 （1）六元内酯环型的强心甾类：基本结构为蟾酥二烯，具有24个碳原子，在C3位上有β- OH、C14位上有β-OH或14β、15β- 环氧，A／B环为顺式，属粪甾烷型，B／C环和其它天然甾体化合物相同为反式，C／D环和强心甾烯相同为顺式。 蟾酥的强心甾类化合物有游离型和结合型之分，游离型称蟾毒配基（bufogenin），已知有近20种，如华蟾毒配基（cinlbufogenin）、脂蟾毒配基（resibufogenin）、蟾毒灵（bufalin）等，大多为干燥加工过程中的分解产物。 上述蟾毒配基在新鲜蟾酥浆中不是以苷的形式存在，而是在C3-羟基与辛二酰精氨酸等结合成酯。 （2）五元强心甾烯蟾毒类：如沙门苷元- 3- 辛二酸精氨酸酯、沙门苷元- 3- 硫酸脂、沙门苷元- 3- 半辛二酸酯等。 * 2．吲哚类生物碱 3．甾醇类 * * * * * （一）定性分析 蟾酥甾体类成分的化学定性分析可分二类： （1）强心甾烯蟾毒类：普通的强心苷类试剂如Legal、Raymond、Kedde等试剂，可用于强心甾烯蟾毒类的鉴定。 （2）蟾蜍甾二烯类：上述试剂对于蟾蜍甾二烯类没有显色反应，通常用浓硫酸使蟾蜍甾二烯类显色，也可用三氯化锑、磷钼酸试剂。 蟾酥中蟾毒配基在进行硅胶TLC时可用的展开剂有环己烷- 氯仿- 丙酮（4：3：3）、环己烷- 丙酮（7：3）、正己烷- 乙酸乙酯（1：9）、乙醚- 乙酸乙酯（6：4）等。 鉴于蟾酥强心甾体类化合物多有紫外吸收，如强心甾烯的λmax为217土3nm，蟾蜍甾二烯的λmax约300nm，可用TLC和UV进行定性和定量分析 * 1．化学法 （1）取蟾酥粉末约0.1g，加甲醇5m1，浸泡1h，滤过，滤液中加对二甲氨基苯甲醛固体少量，滴加硫酸数滴，即显蓝紫色. （2）取蟾酥粉末0.1g，加氯仿5m1，浸泡1h，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。 （3）取0.5g样品置磁点滴板上，加3d浓硫酸 脂蟾毒配基 柠檬黄- 绿 – 黄绿 华蟾毒配基 黄- 桔黄- 紫红- 蓝 蟾毒灵 灰棕- 棕- 灰- 灰绿 * 2．薄层色谱法 （1）药典法 取蟾酥粉末0.2g，加乙醇10ml，加热回流30min，滤过，滤液置10ml量瓶中，加乙醇至刻度，作为供试品溶液。另取蟾酥对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取脂蟾毒配基及华蟾酥毒基对照品，加乙醇分别制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。 吸取上述4 种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷- 氯仿- 丙酮（4：3：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个绿色及一个红色斑点。 * 薄 层 板 高效硅胶60F254预制板；厚度：200μm * （2）麝香保心丸中蟾酥的TLC * （二）定量分析 1．高效液相色谱法 （1）药典法 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈（50：50）（用磷酸调节pH值为3.2）为流动相；检测波长为296nm；柱温40℃。理论板数按华蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰计算应分别不低于4000。 对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品各10mg，分别置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取5ml，各置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含华蟾酥毒基、脂蟾毒配基各50μg）。 * 供试品溶液的制备：取蟾酥细粉约25mg ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品含华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总