月季组织培养课件.ppt

生物技术二班 于涛 生物技术二班 于涛 实验设备 ：烧杯、移液器、玻璃棒、500ml容量瓶、100ml锥形瓶三个、微波炉、解剖刀、镊子、超净工作台、酒精灯、酒精棉等。 实验材料：75%酒精、0.15%升汞、6--BA、MgSO47H2O、FeSO47H2O、NH4NO3、Na2 EDTA 2H2O、CaCl22H2O、生长调节剂、KNO3、KH2PO4、NAA、KI、肌醇、H3BO3 、烟酸、MnSO4 4H2O 、盐酸硫胺素、ZnSO4 7H2O 、盐酸吡哆醇、Na2MoO4 2H2O、甘氨酸、CuSO4 5H2O。 一.植物组织培养的基本过程 不同植物激素使用顺序和使用量 使用顺序 实验结果 先生长素， 后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素， 后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 生长素细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 不同植物激素使用顺序和使用量 生长素细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 4、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因： 5、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培 养 栽 培 实验操作 移 栽 冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上 组织培养过程中的影响因素1 .外植体 外植体的大小以及取材部位、时间等直接影响月季组培的效果，选择合适的外植体是月季组培成功的重要保证。 外植体很小时，有利于培养脱毒的植株。对月季的杉树坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。 此外，外植体的取材时间及培养所需时间对月季嫩茎的发育和增殖也有影响。对于“Bulgarian rose”而言，选取外植体的最佳时间是冬季（1 ~ 3 月）；月季的培养时间以 28d继代一次较好，超过28d，茎的数目就不再增加了。 2 植物生长调节剂 影响月季组织培养的植物生长调节剂主要有细胞分裂素（如BA、ZT、ZR、2iP、ipA和 TDZ等）、生长素（如 NAA、IAA和 IBA）和赤霉素（GA3）3 种。细胞分裂素参与克服顶端优势的过程，因而能促进侧枝的萌发和生长，试管中嫩芽的繁殖主要是细胞分裂素影响的结果。 在茎增殖阶段，细胞分裂素浓度过高对下一步的生根培养有影响，增殖用的 BA 含量愈高，对生根的抑制愈严重。在生根阶段，细胞分裂素对生根和移栽有抑制效应，使用 0.3mg/L 或更高浓度的 2iP 培养基进行月季组织培养，组培苗一般无法生根，即使 2iP 浓度较低时能形成一些根,在移栽时也会失败。因此，一般在月季生根培养基中都尽可能降低细胞分裂素的浓度，而使用一定量的生长素。 但生长素浓度过高也同样会抑制月季根的形成，只有选择适宜的生长素浓度才能有效地促进根的生长。用 IAA 诱导生根，浓度只能在 1 mg/L 以下，IAA 浓度过高根的诱导有下降趋势。对 NAA而言，浓度为 0.5 mg/L时对月季的诱导生根和提高移栽成活率有良好效果。在切花月季萨曼莎的组织培养试验中，为保证生根率， IAA、IBA、NAA的浓度均需做适当控制 3 .培养基 用于月季的基本培养基种类很多，如 B5、N6、WPM和 MS 培养基等。众多培养基中以 MS 培养基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。培养基的培养成分（主要是各类无机盐浓度）及物理性能（pH 值、糖分以及固化支持物）会影响月季的组培。对 MS 培养基的成分及物理性能进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 MS 培养基中无机盐离子浓度因月季培养阶段的不同而有不同： 1）茎段培养阶段，将带有腋芽的嫩茎接种到不添加任何激素类物质的 MS 和 1/2MS 培养基上，两周后，MS 培养基上的腋芽生长，而在 1/2MS 培养基上的腋芽几乎不萌发或发育不良。通过提高 MS 培养基中氯化钴的浓度，并用硫酸铵代替硝酸铵培养“Bulgarian rose”，可使其茎的生长状况得到改善。同时有报道认为在 MS 培养基中添加硝酸银可以缓解叶片衰败并提高茎段侧芽的生长。 2）诱导生根阶段，一般要求较低的 MS 培养基无机盐离子浓度。Skirvin 等在用（Forever Y