干扰素综述课件.ppt

产生干扰素合成的抑制物 一些病毒编码的双股RNA结合蛋白抑制感染细胞内双股RNA激活途径。 1型干扰素是由病毒感染过程中产生的双股RNA激发产生的。双股RNA被认为能活化细胞激酶，包括组成性表达的PKR，导致一些参与启动干扰素表达的转录因子激活，如IRFs，NF-κB和ATF-2/Jun。 这样的病毒蛋白有呼肠孤病毒的σ蛋白、猪轮状病毒的NPS3蛋白、流感病毒的NS1蛋白等，如：缺失NS1基因的A型流感病毒可使其毒力致弱，因为其抑制1型干扰素系统的能力下降。 一些病毒可能通过抑制干扰素合成的信号传导来阻碍干扰素的产生。 如人8型疱疹病毒编码4种IRF同源物，通过负调控作用抑制IRF-1、IRF-3和IRF-7等功能。人16型乳多空病毒的E6蛋白直接与IRF-3结合并阻止其活化。腺病毒E1A蛋白与IRF-3竞争集合CBP/p300，CBP/p300是一个转录共激活因子，增强包括IRFs和STATs等转录因子的活性。人16型乳多空病毒的E6蛋白也以CBP/p300为作用目标。另外，非洲猪瘟病毒的A283L基因产物是I-κB的同源物能阻止转录因子进入细胞核抑制NF-κB的激活从而封闭NF-κB信号传导途径。 长效抗菌肽设计及基因改造 蛋白质药物主要通过降解、排泄、以及受体介导的内吞等作用方式在体内被清除。其中，分子量小于20 kDa的多肽类药物在代谢过程中易于由肾小球滤过，并在通过肾小管时被蛋白酶部分降解而从尿中排出，半衰期很短。 近年来，各国学者纷纷着手长效多肽药物的研究，并取得了一定成效，改造方法主要涉及到化学修饰、基因融合、点突变以及制剂改造等 。 思路设计 通过基因融合在抗菌肽C端引入多肽载体蛋白基因，增加多肽药物分子量或改变与受体的亲和性等原理延长药物半衰期。 猪IgG Fc片段 细胞因子（ChIFN、PoIFN） 干扰素 融合猪IgG CH3抗菌肽基因的拼接 CM/CH3、Mag/CH3基因的拼接，基因全长分别为460bp和480bp左右，其中CH3基因约为420bp，如右图所示。左图为其重组载体的酶切鉴定。 1　2　3 2000 1000 750 500 250 100 　1　2　3　M　4　5 融合poIFN、ChIFN抗菌肽基因的拼接 CM/PoIFN、Mag/PoIFN、CM/chIFN、Mag/chIFN融合基因的设计合成及表达载体构建。左图为chIFN、poIFNPCR扩增结果。右图是重组载体pPICZ-CM/PoIFN、pPICZ-Mag/PoIFN、pPICZ-CM/chIFN、pPICZ-Mag/chIFN的PCR鉴定结果,所用引物为自设计引物，鉴定抗菌肽基因是否正确插入。 1　2　M 2000 1000 750 500 250 100 重组CM/CH3、Mag/CH3 的SDS_PAGE １　　２　　３　４　５　M CM/CH3、Mag/CH3长效肽的体外抗菌活性 重组抗菌肽CM/CH3、Mag/CH3经浓缩15倍后体外抗菌活性可达到cecA-mil杂合抗菌肽浓缩10的杀菌活性。如右图所示。其中CM/CH3较Mag/CH3活性高。 干扰素综述 30年代 ,人们发现机体感染某一病毒后,会对另一种抗原性毫无关系的病毒发生干扰现象。英国科学家Isaacs和Lindemann于1957年发现的。将56℃加热1h灭活的流感病毒加入到鸡胚绒毛尿囊膜碎片中，孵育后发现此膜能抵抗活流感病毒的感染，并向外周释放具有干扰活性的因子，离心后吸取的上清液能使别的鸡胚绒毛尿囊膜碎片获得对病毒的抗性,他们将该物质称为干扰素。 1980年，国际干扰素命名委员会正式将其定名为interferon,简写为IFN，干扰素是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性的发挥又受到细胞基因组的调节和控制，涉及RNA和蛋白质的合成。现在，干扰素一般指脊椎动物受到干扰素诱生剂作用后合成的一类具有细胞功能调节作用的蛋白。 动物机体内一般情况下不产生干扰素，即使在病毒的诱导下也仅仅产生极微量的干扰素，难以提纯。因此，开发高效生产干扰素的体系是干扰素研究和应用的 基础。 80年代以来，人的干扰素基因克隆表达成功后应用到临床，获得了抗病毒的显著效果。美国FDA在1986年批准Roche公司的基因工程α -2a干扰素和Schering公司的基因工程α-2b干扰素上市，当年的市场销售额就达1.5亿美元。基因工程β、γ干扰素分别在1990年、1993年批准上市。1992年，我国第一个基因工程药物a-1b干扰素获得国家一类新药证书。目前60多个国家批准基因工程干扰素上市，成为医药生物技术产品业的重要产品。  1986年，英国食品药品管理委