细菌总论3-消毒灭菌与实验室安全课件.ppt

第三章 消毒灭菌与实验室生物安全 Disinfection and Biosafety 病原生物学教研室 第一节 消毒灭菌的常用术语 灭菌 (sterilization) 利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞/病毒/真菌/细菌等。 消毒 (disinfection) 杀死物体或环境中病原微生物的措施，并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物。 防腐 (antisepsis)： 体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。 清洁 (cleaning)： 通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数 量的过程。 无菌 (asepsis): 不存在任何活菌, 即灭菌结果 无菌操作 (aseptic technique)： 防止细菌进入人体或其他物品的操作技术 热力灭菌法 辐射杀菌法 物理学方法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法… 化学方法 各种高/中/低效的消毒剂 第二节 消毒灭菌的方法 Ⅰ 焚烧： Ⅱ 烧灼： Ⅲ 干烤：常规160~180℃,2h Ⅳ 红外线： （一） 热力灭菌法 　1、干热灭菌法 脱水和分子变性。一般繁殖体在干燥状态下 80~100℃ 1h，芽胞160~170 ℃ 2h 被杀死。 　2、湿热灭菌法 ① 巴氏消毒法 (pasteurization) 61.1~62.8 ℃ 30min；71.7℃ 15~30s，牛奶、酒类消毒。 ② 煮沸法：一般细菌100℃5min , 芽胞1~2h；加入2％碳酸钠可提高沸点，又可防止金属器皿生锈，用于消毒食具/刀剪/注射器。 ③ 流动蒸汽消毒法： 100℃蒸汽 15~30min杀死细菌，但芽胞不能全部杀灭。 ④ 间歇蒸汽灭菌法 100 ℃蒸汽15~30min杀死繁殖体，孵箱37 ℃过夜；如此重复三次以上。适于不耐高热的含糖、牛奶等培养基。 ⑤ 高压蒸汽灭菌法 103.4kPa蒸汽压，121.3 ℃，15~20min.适于培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿热物品的灭菌。不能杀灭朊粒。 　2、湿热灭菌法 湿热与干热灭菌效果的比较 热型 温度(℃) 时间 布层内的温度(℃) 灭菌效果 （h） 20层 40层 100层 湿热 90～105.3 3 101 101 101.5 完 全 干热 130～140 4 86 72 70.5 不 完 全 相同温度下，湿热灭菌效果优于干热灭菌 湿热比干热灭菌好的原因 1、细菌蛋白质在湿热中易于凝固变性。 2、湿热穿透力较强。 3、湿热蒸气有潜在热效应，可迅速提 高被灭菌物体的温度。 不同规格高压蒸汽灭菌锅 （二）辐射灭菌法 电离辐射 非电离辐射 1、电离辐射： 包括X、β、γ射线 机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜； 产生过氧化氢等 特点： β穿透力弱， γ穿透力强 用途： 食品、药品、一次性塑料等 2、非电离辐射 （1）紫外线 改变DNA分子构型，干扰DNA复制和转录 穿透力弱，只能用于手术室、传染病房、 细菌实验室等的空气消毒。 （2）日光 能杀死大部分的微生物 （3）微波 非金属器械(玻璃陶瓷塑料等)消毒； 必须有一定量水才有灭菌效果。 （三）滤过除菌法 主要适合于不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气的等的除菌。 不能滤过支原体、衣原体和病毒。 层流室 （四）超声波消毒法 原 理：空穴效应 用 途：裂解细菌，尤其对G+更敏感。 主要用于粉碎细胞，提取细胞 组分或制备抗原等。 （五）干燥与低温抑菌法 干燥法常用于保存食物 低温可使细菌的新陈代谢减慢，故常用作保存细菌菌种；冷冻真空干燥法是目前保存菌种的最好方法。 二、化学消毒灭菌法 化学消毒剂的杀菌机制： 促进菌体蛋白质变性或凝固 干扰细菌的酶系统和代谢 损