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细菌数量测定---标准平板计数法 一、实训目的 1、掌握菌液稀释的方法和步骤。 2、掌握浇混接种的操作步骤。 3、掌握菌落计数的原理与方法 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即代表原样品中的一个单细胞。 二、实训原理 统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。 三、实训仪器和材料 1、仪器:恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅,电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、试管架、酒精灯 2试剂:大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培养基(营养琼脂培养基),生理盐水、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水 (二)仪器包扎(每组用量) 培养皿7套 1mL吸量管7支,包扎灭菌 (三)菌液稀释 1、编号 (1)无菌平皿7套,分别标记为10-4、10-5、10-6各2套,留一平皿做空白对照。 2、标记 (2)6支盛9mL生理盐水的灭菌试管一次标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 (四)浇混接种 1、取样:用3支无菌吸管分别精确吸取10-4、10-5、10-6的的稀释液0.2 mL,对号放入编好号的培养皿中。 2、倒平板:在上述平皿中倒入熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基约15~20 mL,置水平位置,迅速旋动混匀,待凝固后,于37℃培养箱中倒置培养24h。
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