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生物分离技术 第二章 生物材料的预处理技术 发酵液成分很复杂，包含菌（细胞）体，胞内外代谢产物，及剩余的培养基成分等。 首先要进行培养液(原料液)的预处理和固液分离，才能进行后续操作： 胞外产物——滤液——代谢产物。 胞内产物——富集菌体(细胞)——细胞破碎 为何要对原料液进行预处理？ 预处理的目的 预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率： ⑴改变原料液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度； ⑵ 相对纯化，去除原料液中的部分杂质（高价无机离子和杂蛋白质），以利于后续各步操作； ⑶尽可能使产物转入便于后处理的一相中（多数是液相）。 预处理方法措施 一、降低原料液黏度 二、凝聚与絮凝 三、调整pH 四、去除杂质不溶性多糖 五、高价无机离子的去除 六、杂蛋白的去除 七、杂质DNA的去除 八、原料液的脱色 九、加入助滤剂和反应剂提高过滤效果★ 加热降低液体粘度 降低液体粘度（加水稀释法和加热法）可有效提高过滤速率。 加热使蛋白质变性凝固 变性蛋白质的溶解度小。如柠檬酸发酵液加热至80℃以上，可使蛋白质变性凝固，过滤速度加快。 凝聚：胶体粒子在中性盐促进下脱稳相互聚集成大粒子（1mm） 机理：1）中和粒子表面电荷 2）消除双电层结构 3）破坏水化膜 （1）胶体双电层结构 原料液中细胞表面带有负电荷，由于静电引力使溶液中反离子被吸附在其周围，在界面上形成了双电层。 正离子同时受到使它们均匀分布的热运动影响，具有离开胶粒表面的趋势。 胶体双电层结构 胶体双电层结构 （2）凝聚机理 （3）常用的凝聚剂电解质： 絮凝：胶粒在高分子絮凝剂的作用下发生桥架连接作用而形成絮凝团的过程。 机理：架桥作用 （1）絮凝机理 高分子絮凝剂的吸附架桥作用 （2）絮凝剂 2）天然有机高分子絮凝剂 人工合成有机高分子絮凝剂虽然发展很快，但还存在着残留单体有毒，生物降解难等问题，所以其应用受到了限制。天然有机高分子絮凝剂具有无毒，易生物降解，原料来源广等优点。 天然有机高分子改性絮凝剂根据其原料来源不同可分为淀粉类、纤维素类、植物胶类和聚多糖类。 其中淀粉改性絮凝剂的研究开发最引人注目。 3）无机高分子聚合物 有聚合铁系和铝系两大类 铁系絮凝剂具有操作简单、费用低，受温度影响小，亲和力强，能有效地去除悬浮物、表面活性剂、破坏油水乳状液的能力很强等优点，缺点腐蚀性强、稳定性差。 铝系是目前应用广、工艺较成熟的一类无机金属盐絮凝剂，絮凝效果好，缺点具毒性等。 微生物絮凝剂 微生物絮凝剂是近年来研究和开发的新型絮凝剂， 一类由微生物或其分泌物产生的具有絮凝细胞功能的代谢产物。 包括直接利用微生物细胞的絮凝剂、利用微生物细胞壁代谢产物的絮凝剂和克隆技术所获得的絮凝剂 主要成分是糖蛋白、粘多糖、纤维素及核酸等高分子物质。 微生物絮凝剂和天然絮凝剂与化学合成的絮凝剂相比，最大的优点是安全，无毒和不污染环境。 （3）絮凝的影响因素 ①发酵液的性质（细胞浓度，表面电荷）； ②絮凝剂的浓度，最佳用量为粒子表面积约有一 半被聚合物覆盖； ③絮凝剂的分子量； ④pH 控制； ⑤搅拌速度和时间。 三、调整pH 细胞(碎片)及某些胶体物质在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。 调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。大幅度改变pH还能使蛋白质变性凝固。 通过调整pH值改变膜过滤中易吸附分子的电荷性质，可减少膜堵塞和污染； 影响离子型絮凝剂的电离度。 四、去除杂质不溶性多糖 不溶性多糖(淀粉)会增大原料液黏度。 加淀粉酶可把淀粉水解为单糖(可溶)，达到去除的目的，同时降低了原料液黏度。 高价无机离子的去除方法 六、杂蛋白的去除 1. 杂蛋白去除-沉淀法 precipitation 蛋白质变性例子 链霉素生产中，采用调pH至酸性（pH3.0），加热至70℃，维持半个小时的方法来使蛋白变性，能使过滤速度增大10-100倍，滤液粘度可降低1/6。 柠檬酸发酵液，采用加热至80℃以上，使蛋白质变性凝固和降低发酵液粘度，从而大大提高了过滤速度。 3.杂蛋白去除- 吸附法 adsorption 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾K2Zn3[Fe(CN)6]2的胶状沉淀来吸附蛋白质，利用此法除蛋白质已取得很好的效果。 在枯草杆菌发酵液中，常加入氯化钙和磷酸氢二钠，这两者本身生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其它不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而加快了过滤速度。 七、杂质DNA的去除 杂质DNA也会引起悬浮液黏度增大。 1、核酸酶水解 2、超声波破碎 3、层析技术：离子