14---生物有效成分的制备-4.-.ppt

第12章 生物有效成分的制备 本章内容如下 12.1 概述 12.2 材料的选择与处理 12.3 确立测定方法 12.4 有效成分的提取 12.5 有效成分的浓缩 12.6 有效成分纯化方案确定 12.7 有效成分纯度和性质的分析 12.8 实际运用（用发表的论文讲述） 第一节： 概述 一、生化物质: 通常是指动物 、植物和微生物进行新陈代谢时所产生的各种具有活性功能的一些化合物 包括蛋白质（包括酶）、核酸和多糖等生命大分子物质，还有氨基酸、黄酮、维生素、单宁、生物碱、木质素等小分子物质。 二、生物有效成分: 是指欲从生物细胞中分离纯化出来的某一目的物质（主要研究生命大分子物质），其余部分则统称为杂质。 第一节： 概述 三、生物有效成分制备的基本步骤： 原料的选择和预处理 (含原料的粉碎) 提取 纯化 干燥及保存 成品、制剂及改型 第一节： 概述 四、生物有效成分制备要注意的几个问题： （1）生物材料的组成成分非常复杂 （2）在生物材料中，有些化合物含量很低或极微，有的只有万分之几。近年来，用所谓“钓鱼法”进行提取 第一节： 概述 四、生物有效成分制备要注意的几个问题： （3）许多生物活性物质，一旦离开了生物体内环境，很易变性及被破坏 （4）生化分离制备过程几乎都在溶液中进行，各种温度、pH、时间、离子强度等参数，对溶液中各种组成的综合影响，常常难以确定。 第二节：材料选择与处理 一、 材料的选择原则： （1）有效成分含量多 （2）稳定性好 （3）来源丰富 （4）保持新鲜 （5）提取工艺简单，有综合利用价值。 第二节：材料选择与处理—材料选择 为提高其质量、产量和降低生产成本，原料选择时还要注意以下各项： （1）原料的种属 （2）发育阶段 （3）生物状态 （4）来源部位 第二节：材料选择与处理 二、 材料处理 一般来说，选择到合适的材料后，应及时使用。否则所需的有效成分会部分甚至全部被破坏，从而影响得率。 若不能立即使用，则需要采用低温、避光、干燥环境或加入稳定剂等条件中的一种或几种进行保存。 第二节：材料选择与处理--材料处理 1 .动物脏器 1 冰冻（鲜料保存） -10℃ 冰库（短期保存）或-70 ℃低温冻箱（数月不变质）贮存。 2 干燥（粉末保存） a 对一般的小组织进行处理 b 对于含耐高温有效成分材料的处理 第二节：材料选择与处理--材料处理 2 .植物组织： A. 枝、叶、根等营养器官 a、使用鲜活材料用水洗净，立即使用，或在10小时内置-4~-30 ℃冰箱中贮藏备用。 b、若使用植物干粉时，可以在太阳光或烘箱中烘干，磨成干粉，贮于瓶中备用。 B. 植物种子 则需泡胀或粉碎后才可使用。 第二节：材料选择与处理--材料处理 3. 微生物 微生物种类多、繁殖快 、培养简单、诱变容易和不受季节影响，它已成为生物大分子制备的主要材料之一。 （1）菌种有效成分在胞外时的处理 （2）菌种有效成分在胞内时的处理 第二节：材料选择与处理--材料处理常用方法 细胞破碎方法： 1、机械法： 有研磨法、撞击法、高速捣碎法、高速匀浆法、高速珠磨法 、超声波法 第二节：材料选择与处理--材料处理常用方法 细胞破碎方法： 2、非机械法： （1）酶学破碎法：外加酶制剂、自溶法、抑制细胞壁合成。 （2）物理破碎法：冻结-融化法、渗透压差法 （3）化学破碎法：有机溶剂法、酸碱处理法、表面活性剂（SDS 等） 第三节 测定方法的确立 一般情况下常用的测定方法有：光谱法、电化学法、生物活性检测法、免疫分析法、生物传感器法。 1.光谱法 (确定样品的量要先作一个标准曲线。) 第三节 测定方法的确立—光谱法 〈1〉吸收光谱法。 （常用） 定义：利用目的物质特定的吸收波长（波峰对应的波长）来测定其含量。（简单常用） 可分为：a 直接测定法.. b 比色法… 第三节 测定方法的确立—光谱法 〈2〉荧光法 （前提是待测定物质会产生荧光或经过处理产生荧光） 定义：用荧光计测量荧光强度以确定物质含量的方法 当分析物含量，用吸收光谱法不能检测时，可改用荧光分析法。 此法的精确性、重复性和灵敏度比吸收光谱法要好。 第三节 测定方法的确立—光谱法 〈3〉 浊度法 定义：是通过测量透光量大小来对分散物质的浓度加以测定的方法 极稀的悬浮液可以采用此法测定，即测定悬浮液在不被吸收的波长下表观的消光值。 第三节 测定方法的确立 2.电化学法： 有些反应过程会放出质子氢（H+ ），可用灵敏的pH计或NaOH溶液滴定等方法追踪其变化,从而计算出欲测物的含量或活力。 如:葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应，可用NaOH 溶液滴定氧化产物含量，再推算出葡萄糖氧化酶的活力。 第三节 测定方