《生物工程下游技术第十一章_无机基质高效色谱填料》课件.ppt

化学键合固定相：将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固定液的机械涂渍，它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。 2.极性键合相填料 键合固定相类型： 用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇基(Si一OH)与有机分子可成键,即可得到各种性能的固定相。一般分3类：（1）疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基。（2）极性基团 如氨丙基、氰乙基、醚和醇等。（3）离子交换基团 如作为阴离子交换基团的胺基、季镀盐；作为阳离子交换 基团的磺酸等。 键合固定相成键类型 a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 键合固定相的制备 （l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相, 最先用于液相色谱。用醇与硅醇基发生酯化反应： ≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20 这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。 共价键键合固定相不易水解，并且热稳定较硅酸酯好。缺点是格氏反应不方便；当使用水溶液时，必须限制pH在4～8范围内。 （2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相制备反应如下： （3）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相 制备反应如下： 这类键合固定相具有热稳定好，不易吸水，耐有机溶剂的优点。能在70℃以下，PH=2～8范围内正常工作，应用较广泛。 第四节 反相填料及色谱柱 非极性固定相，极性流动相 在色谱的应用中，反相模式占57％。 反相色谱填料的种类与性质 品种繁多，性质各异。 市场主流：无机材料为基质制备的填料 在硅胶基质的填料中，以键合有C18、C8、C4及C3的球形、全多孔填料最常见。 参见P239：表11－6；P242－244：表11－7。 第五节－第八节 其它色谱类型填料 自学！ 请注意掌握几个要点： 色谱的分离原理 色谱填料的种类与性能 色谱填料的制备 常见的色谱填料 第九节 生化分离用色谱填料的新进展 未来液相色谱的特点：两极分化式发展 适应制备色谱需要：高效、高选择性、高速、低成本 液相色谱 适应分析色谱需要 ：高效、高选择性、高通量、快速 主要体现： 提高柱效 提高选择性 提高化学稳定性 提高分离速度 提高生物相容性 提高性能重现性 提高性能价格比 具体地： 细粒径填料：粒径减小，理论塔板数增加，但柱子渗透性降低，操作压力升高。若缩短柱长可适当缓解，但单柱柱效不明显。 降低硅胶填料的非特异性吸附：长期问题－对碱性溶质非特异性吸附，乃因硅胶中的杂质金属离子及键合时在硅胶表面引起的硅羟基。 贯流色谱：既有通常的微孔或大孔，又有贯穿整个颗粒的超大孔。同时具高流速、高效率、高样品负载量和低操作压力的特点。 整体柱：即连续固定相，用原位聚合和类似浇铸的方法，形成整体、连续的柱体，不需用细粒径的填料填装。 放大1300倍的君影草 放大10倍的拟南芥根部 Bellco Glass生物反应器 放大13倍的结晶混合物 放大100倍的专业纸纤维 放大200倍的链孢霉 晶体森林 人体免疫系统抵御病菌 鱿鱼吸管 Thank you! 第十一章 无机基质高效色谱填料 微孔型 大孔型 微孔 微孔 薄膜型 表面多孔型 离子交换层 惰性核 惰性核 离子交换剂硅胶层涂覆 HPLC中常用的几种微粒类型 硅胶 可控孔径玻璃 其它：氧化铝、氧化锆、氧化钛、碳和石墨微球。 制备:制成适宜的球形或无定形颗粒,化学键合或涂层法改性。 第一节 无机基质 一.硅胶: ①表面含丰富硅醇基或硅羟基, 可化学键合或改性; ②表面存在大量物理吸附水,增加处理或修饰复杂性。 1.化学性质:多孔二氧化硅 化学性质稳定,pH适应范围1-9，安全pH范围为2-8。 晶型二氧化硅表面可能仅有自由硅羟基； 无定形硅胶则有自由硅羟基、邻位硅羟基、氢键结合水或物理吸附水。 HPLC硅胶担体的表面 物理吸附水的去除 ---是硅胶衍生反应中不可或缺的一步。因为物理吸附水与硅羟基竞争硅烷化试剂的反应,可能引起