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垃圾桶屏幕：在体外生长的嗜肺军团菌转座子图书馆。嗜肺军团菌转座子突变体库（?1010细菌）的液稀释埃媒体，然后在37℃培养过夜° C至固定相。固体CYET媒体含卡那霉素的单菌落接种细菌生长在37 ° C 4 D。据估计，100,000 - 150,000细菌菌落收获，重悬在埃（?2500 cfus /毫升）和混合同质化。从这个暂停，一式三份等分OF2× 嗜肺军团菌缺失突变体的建设。基因簇已被删除,在费城嗜肺军团菌1株LP02使用双重组自杀载体的战略pSR47s以下（65）例外：3000 bp的片段直接上游和下游各集群用于同源重组。引物对质粒建设列于表S1。使用前，所有的质粒进行测序。在pentuple突变，BamHI位氯霉素5组删除从pM_Cm克隆电阻盒（PM - GM是一种礼物赵罗青，珀杜大学，州West Lafayette，IN）到BamH位现场5组删除质粒，pYA71。对于每一个突变，100-600个人菌株经PCR筛选。随后使用这些突变体分析yses，其相应的缺失突变基因芯片验证分析（Si材料和方法。S3的图）。 在体外生长曲线。嗜肺军团菌株生长在固体介质稀释在埃含胸苷2-3×108bacteria/mL的媒体。 BAC -terial增长在37° C的监测16-26 h阿里稀释培养q