罗非鱼维氏气单胞菌的分离鉴定和药敏试验.PDFVIP

第３２卷第３期 水 生 态 学 杂志 　Ｖｏｌ．３２，Ｎｏ．３ ２０１１年　５月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｙｄｒｏｅｃｏｌｏｇｙ 　Ｍａｙ，　２０１１ 罗非鱼维氏气单胞菌的分离鉴定和药敏试验 １，２ １ １ １ １，２ １ 黎　炯 ，叶　星 ，卢迈新 ，邓国成 ，迟妍妍 ，黄樟翰 （１．中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州　５１０３８０；２．上海海洋大学水产与生命学院，上海　２０１３０６） 摘要：从患病罗非鱼（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）鱼苗的病灶处分离到１株细菌ＧＤＺ１，人工感染试验显示，该分离株具 有较强毒力。经ＡＴＢ３２Ｅ细菌鉴定系统鉴定、补充生化鉴定和１６ＳｒＲＮＡ基因序列分析，确定该病原菌为维氏气 单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｖｅｒｏｎｉｉ）；药敏实验结果显示，２９种药物中，米诺环素等１５种化学试剂对该病原菌具有较强的 抑菌作用。 关键词：罗非鱼；维氏气单胞菌；分离；鉴定；药物；敏感性 中图分类号：Ｓ９４８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１６７４－３０７５（２０１１）０３－０１３２－０５ 　　罗非鱼（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）隶属鲈形目、鲈形 １　材料与方法 亚目、丽鱼科、罗非鱼属（亦称丽鲷科、丽鲷属），该 属鱼类原产于非洲，现已成为世界性养殖鱼类。中 １．１　试验材料 国是罗非鱼养殖大国，其养殖产量占世界总量的 发病罗非鱼（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓ，ＧＩＦＴｓｔｒａｉｎ） ５０％以上；广东、广西和海南三省是我国罗非鱼的主 鱼苗样本采自广东珠海养殖场，均尾重０．５ｇ左右， 养地，每年出口额超过７亿美元，出口量超过２０万ｔ 健康罗非鱼由台山某罗非鱼养殖场提供，均尾重约 （折合活鱼近６０万ｔ），仅是广东每年罗非鱼的产量 ０．５ｇ。ＰＣＲ仪为ＥＤＣ－８１０（广州东胜创新生物科 约６０万ｔ（卢迈新和黄樟翰，２００５）。抗病力强是罗 技有限公司），ＡＴＢ细菌鉴定系统及生化鉴定试剂 非鱼被广泛养殖的一个主要因素，但近年来，我国罗 条ＩＤ３２Ｅ等均为法国Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ公司产品；细菌基 非鱼的细菌性病害频繁发生，海豚链球菌、无乳链球 因组提取试剂盒购自广州铂尔生物科技有限公司； 菌、嗜水气单胞菌和爱德华氏菌等均可引起罗非鱼 药敏实验所用的抗生素药物购自浙江杭州天和微生 死亡（刘加波等，２００６；李波等，２００８；邓显文等， 物试剂有限公司；ＰＣＲ反应体系产品购自Ｔａｋａｒａ公 ２００９；卢迈新等，２０１０）；其中，２００９年链球菌病的暴 司；其它试剂均为国产分析纯。 发使罗非鱼养殖业蒙受了巨大损失；因此，加强对养 １．２　病原菌的分离与培养 殖罗非鱼的病害检测，随时掌握病害发生情况，迅速 发病罗非鱼的主要症状为肠道肿大、有积液、肌 制定有效的防控措施，对于确保罗非鱼养殖业的健 肉轻微出血，现场用７５％的酒精棉球对样鱼体表进 康发展具有十分重要的意义。２０１０年３～５月，广 行消毒，无菌取样器取其肝、脑、肾和肠组织，划线接 东珠海某罗非鱼养殖场发生了较大范围的病害，感 种于血琼脂平板。２８℃培养２４ｈ后，挑取形态一致 染率与死亡率均较高。本实验室即到现场进行调 的优势菌落进行纯化培养，纯化后的细菌用于人工 查，并分离患病鱼病原菌，对其中１株致病菌进行分 感染试验和生化及分子鉴定。 类鉴定以及药物敏感性试验，并提出了针对此病原 １．３　人工感染试验 菌的防治方法。 经分离纯化后的菌株接种于琼脂平板，培养