假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究!-中国科技论文在线.PDF

中国科技论文在线 应用与环境生物学报! ## ，! （$ ）：$# % $ ! ! !#$ % ’’ ( )$*#+,$ -#,( . /001 233454678 9 ##’(#’$ ! ! 假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究 刘瑞田! 宋! 欣! 刘相梅! 康从宝! 曲音波!! （山东大学微生物技术国家重点实验室! 济南! $# (## ） 摘! 要! 应用多种化学修饰剂对假单孢菌)*’ 产生的碱性木聚糖酶+ （,-.+ ）进行了修饰/ 结果表明，作用于色氨 酸和谷氨酸（和0 或天冬氨酸）的试剂123 （1’245657899:.:6:; ）和=? （1’@AB-C’$’DB.-C:75EFG5C:86’H’78CI5.FA ）可分 别使酶活明显降低，而作用与丝氨酸、精氨酸、酪氨酸的试剂对酶活无明显影响/ ,-.+ 的化学修饰动力学分析表明，每 个酶分子中有( 个色氨酸残基和( 个谷氨酸（或天冬氨酸）残基对酶的活性特别重要/ 123 的滴定结果表明，木聚糖的 加入可使( 个色氨酸残基被保护，木聚糖对123 的荧光猝灭有J 的保护作用/ # / J 的燕麦木聚糖可完全阻止123 对,-.+ 的修饰作用；而即使J 的木聚糖也不能阻止=? 的灭活作用/ 123 可使,-.+ 的! 增大 倍，而=? 可使 6 其6FE 降低三分之二/ 这些结果表明，色氨酸和谷氨酸（或天冬氨酸）残基位于,-.+ 的活性部位，且前者位于,-.+ 的 底物结合中心，后者位于酶的催化中心/ 图* 表( 参( 关键词! 碱性木聚糖酶；化学修饰；活性中心 #$ K$$* KLHL / (( %’() *’)* +, %#-%#’.) /0#%.%*) 1+#)2#)* ! MNO 8:A:F. ，3P1) ,:. ，MNO ,:F.Q6: ，?+1) 95.QRF5 S KO T:.R5 !! （#$%$ !’ (%)*+%$*+’ *, -./+*).%0 1/23*0*4’ ，#2%35*34 63.7+8.$’ ，U:.F.! $# (## ，VB:.F ） %3456785$ WF.- 65;:I:47 X4 87; A5 4F9A X:AB FCYFC:. E-CF.F7 （,-.+ ）/ ,-.+ 958C; R :.F9A:ZFA; R- 123（1’.:6:; ）F.; =? （1’AB-C’$’DB-C:75EFG5C:86’H’78CI5.FA ）/ [B Y:.A:9 F.FC-7:7 :.;:’ 9FA; ABFA 5. A4-DA5DBF. F.; 5. 9F4R5E-C Q458D :. 5. 65C98CF4 5I ,-.+ X4 77.A:FC I54 AB ,-.+ F9’ A:Z:A-/ \8CC D45A9A:5. R- E-CF. （# / J ）FQF:.7A AB :.F9A:ZFA:5. 5I .G-6 R- 123 ，956DF4; X:AB J D45A9A:5. FQF:.7A AB ;94F7 :. IC85479.9 ，95.I:46; ABFA F 7:.QC A4-DA5DBF. XF7 FA AB 78R7A4FA’R:.;’