通过陕西推荐申报2016国家技术发明奖项目公示内容项目.DOCVIP

通过陕西省推荐申报2016年度国家技术发明奖项目公示内容 一、项目名称：良种牛羊高效克隆技术 二、项目简介 我国牛羊业面临严重的良种匮乏和疾病困扰，常规技术已难以解决。创新牛羊良种繁育新技术已成为牛羊业发展的关键。体细胞克隆技术、基因定点精确编辑技术现已成为牛羊良种繁育的关键技术，但前者成功率低、后者安全性差，成为限制优质高效牛羊业发展的瓶颈。本项目历时16年，开展了牛羊良种高效克隆繁育新技术的研究和应用，取得如下创新成果。 1.发现用维生素C、组蛋白去乙酰化酶抑制剂Oxamflatin和组蛋白甲基转移酶抑制剂miR-125b联合处理体细胞和克隆胚，用chromeceptin处理克隆胚，可有效降低克隆胚H3K9me3水平，提高H19的表达，降低Igf-2的表达，纠正体细胞克隆胚的重编程错误，发明了可有效提高体细胞供核能力和克隆胚质量的表观修饰技术；发现IGFBP-7、IFI6等19个基因在克隆胚囊胚期能否正常表达决定克隆胚发育能力，由不同个体体细胞构建的克隆囊胚这19个基因显现出不同的表达谱、和差异显著的发育能力，发明了优秀供核体细胞筛选技术；同时创建了优质卵母细胞筛选方法、体细胞和去核卵高效电融合方法和提高克隆胚质量的体外培养方法，集成创立了牛羊体细胞克隆胚高效发育技术。生产顶级种牛和种羊克隆胚2万多枚，受体牛羊产犊率和产羔率分别达到30.9%和 38.2%，显著高于国内外已有报道。 2.发明了整合酶介导的基因定点插入技术、锌指切口酶和Tale切口酶介导的基因精确编辑技术，在牛羊体细胞的预定位点插入和敲除基因，在细胞水平全面检测基因编辑的正确性，以正确基因编辑的体细胞为供核细胞，高效克隆引入预定突变的牛羊胚胎，创立了牛羊基因编辑体细胞克隆胚高效发育技术，有效排除了随机整合和非特异突变，使克隆牛羊全部正确表达目的基因，解决了原有技术的安全问题。生产良种牛羊基因编辑克隆胚2万多枚，受体牛羊产犊率和产羔率分别达到28.6%和 35.8%，显著高于国内外已有报道。 3.建立了体细胞克隆牛羊高效生产技术和推广模式，克隆顶级种牛1182头、 种羊1236只。用上述克隆种牛和种羊生产良种高产胚胎，在全国推广克隆牛冷冻胚82059枚，生产犊牛41052头，推广良种羊胚41364枚，生产羔羊25685只；利用克隆种公牛和种公羊，生产良种牛37675头、改良牛66026头、良种羊17919 只、改良羊61482只。此外，应用克隆牛羊高效生产技术进行基因编辑体细胞克隆牛羊研制，培育出抗乳腺炎高产奶牛和奶羊育种材料 5 个，富含多不饱和脂肪酸肉牛、肉羊和生产高强度羊毛克隆绵羊等育种材料各1个，为培育优质抗病牛羊新品种、抢占制高点做好了战略储备。 本项目获国家发明专利15项，在Nature Comm等学术刊物发表SCI论文106篇，在国际上产生了重要影响。通过推广应用，在全国形成技术辐射和良种辐射，对提升牛羊种质创新和良种繁育水平，推动我国优质高效畜牧业发展发挥了重要作用，带动了我国动物繁育生物技术的发展，产生了显著的经济和社会效益。 三、客观评价 1. 2013年3月6日，陕西省科技厅组织专家，对西北农林科技大学等单位完成的“牛羊良种繁育关键技术研究与应用”项目进行了成果鉴定。鉴定委员会认为该研究“对加快我国牛羊良种繁育，提升牛羊种质创新能力和育种水平具有引领作用和重大应用价值，总体研究成果达到了国际先进水平，在牛羊胚胎移植规模与效率、抗乳腺炎转基因育种材料创制方面达到国际领先水平。”该成果于2013年获陕西省科学技术奖一等奖。 2. 2015年1月 25 日，陕西省科技厅组织专家，对西北农林科技大学等单位完成的“牛羊基因定点精确编辑技术研究与应用”项目进行了成果鉴定。鉴定委员会认为，本项目“研究成果达到国际领先水平，对推动抗病生物学、基因工程育种和乳腺生物反应器技术的发展，提升我国牛羊业种质创新水平具有重大意义，具有广阔应用前景。”该成果于2015年获陕西省科学技术奖一等奖。 3. 2012 年8 月25 日，内蒙古自治区科技厅组织专家对内蒙古大学完成的“家畜体细胞克隆技术改进与富多不饱和脂肪酸克隆奶牛研制”进行了鉴定。鉴定委员会“一致认为该成果达到国际同类研究先进水平”。 4. 2011年5月30日，科技部农村科技司组织专家对“体细胞高效克隆技术研究”课题进行了验收。专家组认为该课题“创建了提高体细胞克隆胚质量的表观修饰技术、优秀供核体细胞筛选技术，研制出优质卵母细胞筛选方法、高效去核方法和重构胚电融合方法、提高牛克隆胚质量的体外培养方法，集成创立了牛羊体细胞高效克隆技术体系，显著地提高了体细胞克隆牛羊效率。”。 5. 2012年12月23日，陕西省科技厅组织有关专家对西北农林科技大学承担的陕西省科技计划项目进行了验收。验收委员会认为该项目“发