利用3D打印高通量观察斑马鱼肾小球滤过膜损伤.PDF

肾脏病与透析肾移植杂志　 第２７卷　 第 １期　 ２０１８年０２月　 ·７ · ·论　 　 著 · 利用３Ｄ打印高通量观察斑马鱼肾小球滤过膜损伤 陈朝红　 张利文　 侯　 庆　 汪　 玲　 李　 知　 秦卫松　 刘志红 志 　 　 摘　 要　 目的：使用桌面３Ｄ打印机制备兼容微孔板和平皿的斑马鱼定向工具，用于观察分析斑马鱼足细胞 损伤后表型。 　 方法：构建足细胞特异性表达硝基还原酶（ＮＴＲ）的转基因斑马鱼 Ｔｇ（ｐｏｄ：Ｇａｌ４；ＵＡＳ：ＮＴＲ⁃ ｍＣｈｅｒｒｙ），ＮＴＲ／ ＭＴＺ（甲硝唑）系统特异性诱导足细胞损伤，破坏肾小球滤过膜；应用 ＯｐｅｎＳＣＡＤ软件设计模具的 杂 ３Ｄ模型，打印材料为丙烯腈⁃丁二烯⁃苯乙烯；结合３Ｄ模具和全自动体式显微镜对足细胞特异性损伤斑马鱼进行高 通量筛查，对水肿比例和严重程度，蛋白尿程度进行定量分析。 　 结果：桌面３Ｄ打印机制备的模具在微孔板或平 皿内的琼脂凝胶中形成腔室，可排列４８或９６个斑马鱼胚胎样本。 狭长的微腔确保斑马鱼胚胎方向和体位一致且 植 不易移动。 全自动显微镜获取排列在微腔内斑马鱼胚胎的侧面和背面视图，易于观察分析斑马鱼形态、荧光分布 和强度。 　 结论：本研究应用３Ｄ打印机制备模具，高通量定位观察斑马鱼水肿率和蛋白尿表型，是斑马鱼肾脏功 能研究的有效工具。 关键词　 斑马鱼　 高通量筛选　 ３Ｄ打印技术　 足细胞　 蛋白尿 移 Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ⁃ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙｓ ｕｓｉｎｇ３Ｄ ｐｒｉｎｔｉｎｇ ＣＨＥＮ Ｚｈａｏｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＬｉｗｅｎ，ＨＯＵＱｉｎｇ，ＷＡＮＧＬｉｎ，ＬＩ Ｚｈｉ，ＱＩＮ Ｗｅｉｓｏｎｇ，ＬＩＵＺｈｉｈｏｎｇ 肾 Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｊｉｎｇｌｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１６，Ｃｈｉｎａ ＡＢＳＴＲＡＣＴ　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｈａｓ ｅｍｅｒｇｅｄ ａｓ ａ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｍｏｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ． Ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｉｓ ｕｓｕａｌｌｙ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｂｙ ａｃｑｕｉｒｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｉｍａｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｏｒｓａｌ ａｎｄ ｌａｔｅｒａｌ ｖｉｅｗ ｏｆ 析 ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｅｍｂｒｙｏｓ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｗｅ ｕｔｉｌｉｚｅｄ ｄｅｓｋｔｏ