一种改良的扩增cDNA5′末端的方法-园艺学报.PDFVIP

一种改良的扩增cDNA5′末端的方法-园艺学报.PDF

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一种改良的扩增cDNA5′末端的方法-园艺学报

园 艺  学  报  2008, 35 ( 10) : 1533 - 1538 A cta Horticu lturae Sin ica 一种改良的扩增 cD NA 5 末′端的方法 1, 3 2 1 夏  瑞 , 陆旺金 , 李建国 (1 华南农业大学中国荔枝研究中心 , 广州 510642; 2 广东省果蔬保鲜重点实验室 , 广州 510642; 3 广东省农业科学院 果树研究所 , 广州 510640) ( ) 摘  要 : 介绍一种改良的扩增基因 5 ′cDNA 序列的方法 改良 TdT加尾扩增法 。以龙眼为材料 , 采用 TdT (末端脱氧核苷酸转移酶 ) 加尾 、锚定 PCR、巢式 PCR、降落 PCR 等多种策略 。通过与常规方法 (用 TaKaR a试剂盒 ) 对比试验 , 发现该方法原理简单 , 操作性强 ; 扩增特异性高 , 结果真实可靠 ; 同时还具有 快速低廉的特点 , 适合在一般实验室中推广使用 。 关键词 : TdT; RACE; 降落 PCR; D lExp 1 中图分类号 : Q 9432  文献标识码 : A   文章编号 : 0513353X (2008) A M od if ied M ethod of Am plify ing the 5 ′end cD NA Sequence 1, 3 2 1 X IA Ru i , LU W angj in , and L I J ianguo (1 Ch ina L itch i R esea rch Cen ter, S ou th Ch ina A g ricu ltu ra l Un ivers ity, Guangzhou 510642, Ch ina; 2 Guangdong P rovincia l Key 3 L abora tory of P os tha rves t S cience of F ru its and Veg etables, Guangzhou 510642, Ch ina; Ins titu te of F ru it R esea rch, Guang dong A cadem y of A g ricu ltu ra l S ciences, Guangzhou 510640, Ch ina) A b stract: In order to ob tain the fu lllength sequence of gene smore efficien tly, a mod ified m ethod of am p lifying the 5 ′cDNA sequence, nam ed a s modified TD T tailing amp lified m ethod, wa s de signed. M any strate gie s were u sed in th ism ethod includ ing TdT tailing, anchored PCR , ne sted PCR , touchdown PCR. Comp ared w ith a regu lar m ethod u sing a k it ( 5 ′Fu ll RACE Core Set, TaKaR a) , the mod ified m ethod had m an

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