半滑舌鳎Cynoglossussemilaevisgnrh2基因克隆-渔业科学进展.PDF

第38 卷 第 1 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.38, No.1 2 0 1 7 年 2 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Feb., 2017 DOI: 10.11758/yykxjz.20160816002 / 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) gnrh2 基因克隆、 组织分布及卵巢成熟过程中表达分析* 王 滨1,2 柳学周1,2① 刘 权1,3 赵 明1 徐永江1,2 史 宝1,2 (1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ；2. 青岛海洋科学与技术国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 青岛 266071 ；3. 上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306) 摘要 为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2, GnRH2)在 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) 卵巢成熟过程中的生理作用，本研究通过RT-PCR 及RACE 方法 获得了半滑舌鳎GnRH2 全长cDNA 序列；通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA 的组织分 布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示，半滑舌鳎GnRH2 全长cDNA 序列 为538 bp (不包括polyA 尾) ，其中，5非编码区(Untranslated region, UTR)为154 bp，3UTR 为126 bp， 开放阅读框(Open reading frame, ORF)为258 bp ，编码85 个氨基酸的前体多肽，其分子量及等电点 分别为9.69 kDa 和8.55。GnRH2 前体多肽由信号肽、GnRH2 十肽、酶切位点(GKR) 以及GnRH 相 关肽共4 部分组成。序列比对分析发现，GnRH2 在鱼类中同源性极高，尤其是十肽(QHWSHGWYPG) 在所有硬骨鱼类中完全相同。半滑舌鳎GnRH2 与鲈形目同源性最高(89.41%–90.59%) ，其次为鲽形 目、鲑形目和鲀形目(78.82%–85.88%) ，与鲤形目同源性最低(61.18%–71.76%)。gnrh2 mRNA 主要 在脑中表达，在垂体及其他外周组织中表达量极低。此外，组织学分析显示，半滑舌鳎卵巢发育共 分为5 个时期( Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期) 。在卵巢成熟过程中，脑gnrh2 mRNA 表达量在卵黄生成期 (Ⅲ期)显著性增加，达到峰值；随后表达量急剧下降，在成熟期( Ⅴ期)达到最小值；在排卵后期(Ⅵ 期)又显著性增加。然而，在卵巢成熟过程中，垂体gnrh2 mRNA 表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著 性降低，随后在成熟期( Ⅴ期)有所增加，但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降。上述研究结果表明，脑 GnRH2 可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程。 关键词 半滑舌鳎；促性腺激素释放激素2 ；基因克隆和表达；卵巢成熟 中图分类号 S917 ；Q575 ；Q492 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2017)01-0063-10 硬骨鱼类的性腺成熟主要受到脑–垂体–性腺轴 (Gonadotropin-releasing hormone, GnRH)促进垂体促 (HPG 轴) 的调控。下丘脑神经肽促性腺激素释放激素 性腺激素(Gonadotropins, GTHs)即促卵泡激素(Follicle- * 国家自然科学基金项目 、国家鲆鲽类产业技术体系(CARS-50) 、山东省自然科学基金项目 (ZR2016CB02)和中