啤酒中双乙酰的定(EBC法).pptVIP

啤酒中双乙酰的测定（EBC法） 主讲人： 物理性质 双乙酰：亦称双乙酰酮或2，3-丁二酮，黄色油状液体，有苯醌气味，稀溶液有奶油气味，存在于茴香油和奶油中。熔点-3～-4℃、沸点88～91℃，密度（15/15℃）0.990g/cm3，溶于水，能与乙醇、乙醚混溶。当其在啤酒中的含量超过一定浓度(0.15mg/L)时，啤酒就会出现一种令人不愉快的气味，严重影响啤酒的风味和口感质量，因此在啤酒的生产过程中需要对其进行控制。 原理 邻苯二胺与联二酮类反应，生成2,3-二烷喹喔啉，反应式如下： R2C2O2+C6N2H8 R2C8N2H4+2H2O 2,3-二烷喹喔啉的盐酸盐在335nm波长处有最大吸收，其吸光度与联二酮的浓度成正比，根据测得的吸光度可换算出以双乙酰计的联二酮含量。 仪器和试剂 仪器 电子天平（0.1mg）； 紫外可见分光光度计（应符合或高于GB9721要求）； 半微量凯氏定氮蒸馏装置（100mL）。 测定方法 蒸馏 于25mL具塞比色管内加2.5mL水，置于冷凝器下端，使冷凝器下端浸入水中。量取未除气的啤酒100.0mL，加2~4滴消泡剂，迅速加入到已预先加热的蒸馏器中，用少量水冲洗加样口，并做水封。继续加热蒸馏至馏出液近25mL。取下比色管，以水定容至25mL，混匀。 显色 分别取10.00mL馏出液，置于两支25mL具塞比色管中，向1号管加入0.50mL1%邻苯二胺溶液，2号管不加（做空白）。充分摇匀，放置暗处反应20~30min。 计算 讨论 补充 * * 仪器和试剂 试剂 消泡剂 有机硅消泡剂或甘油聚醚。 4mol/L盐酸溶液 量取34mL浓HCl，用水定容至100mL。 1%邻苯二胺溶液 准确称取0.5g邻苯二胺，溶于4mol/L HCl溶液中，并以4mol/L HCl溶液定容至50mL，贮存于棕色瓶中（宜当天配制）。 仪器和试剂 0.5000mg/L双乙酰贮备液 称取0.5000g优级纯双乙酰，用水稀释定容至1000mL，贮于棕色瓶中，冰箱保存（最好现配现用）。 0.2500mg/mL双乙酰标准溶液 吸取双乙酰贮备液5.00mL于25mL具塞比色管中，用水稀释至10.0mL。 测定方法 向1号管中加入2.00mL 4mol/L HCl溶液，2号管加入2.50mL 4mol/L HCl溶液，摇匀。 同时准确吸取0.10mL 0.2500mg/mL双乙酰标准溶液与25mL具塞比色管中，用水稀释至10.0mL。加入0.50mL 1%邻苯二胺溶液，充分摇匀，放置暗处反应20~30min。加入2.00mL 4mol/L HCl溶液。 比色 于335nm波长下，用2cm的石英比色皿，以空白做参比，用紫外可见分光光度计测出样品和双乙酰标准溶液的吸光度，比色操作需在20min内完成。 联二酮（以双乙酰计，mg/L）= ×0.625 无双乙酰标准品，可按下式计算： 联二酮（以双乙酰计。mg/L）=A×1.2-0.01 式中 A——试样的吸光度； 1.2——吸光度与双乙酰的换算系数; 0.01——校正数，可略去。 双乙酰不易纯化，市售双乙酰需测定纯度，然后折算。 蒸馏时加入试样要迅速，勿使成分损失，而且要尽快蒸出，最好在5min内完成。如果蒸馏器体积小，或消泡剂效果差时，可将100mL试样分两次蒸馏（接收在同一支比色管内）。调节蒸汽量，控制蒸馏速度，勿使泡沫过高而被蒸汽带出。 试样蒸馏结束后，加入稀碱液煮沸，以除去附着在容器壁上的残渣，再用热水冲洗至中性（pH试纸检验）。 显色反应宜在暗处进行，如在光亮处可导致结果偏高。 改进EBC法：用4mol/mL盐酸邻苯二胺溶液从啤酒中收集蒸馏物，不仅使结果具有重复性，而且可以省去在黑暗处存放30min的时间。 气相色谱法：结果准确，反应敏感，但所需仪器贵重，操作专业。 *