蛋白质及多糖的测定-紫外可见分光光度法.PDF

蛋白质及多糖的测定-紫外可见分光光度法 目标客户：疫苗研发、,企业 依据标准：中国药典2015 版 检测方法简介： 《中国药典》2015 版 3421 通则 b 型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 0731 通则 蛋白质含量测定法 o 第二法 福林酚法 (1owry法) o 第三法 双缩脲法 o 第四法 2,2-联喹啉-4,4’-二羧酸法(BCA法) o 第五法 考马斯亮蓝法 (Bradford法） o 第六法 紫外-可见分光光度法 详见如下附录 仪器配置： 目前我们涵盖紫外-可见范围的型号都能满足以上应用 我们主要推荐三款仪器。销售人员可以根据客户的经费情况和竞争对手情况，选择推荐。 紫外可见分光光度计Biomate 160 高清晰触摸屏，本机控制，包括生命科学应用软件包 紫外可见分光光度计Evolution201 性能优异，光源3 年保修，符合21 CFR Part11 安全软件， 可做3Q 认证 紫外可见分光光度计Evolution260 性能优异，可变带宽，光源3 年保修，适用于生命科学的 应用模块 （含以上药典方法），符合21 CFR Part11 安全软件，可做3Q 认证 如果有疑问，请咨询赛默飞世尔科技的销售经理或技术人员。 附录 3421 b 型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 本法系依据可溶性糖经无机酸处理脱水产生糖醛(戊糖）或糖醛衍生物，生成物能与酚 类化合物缩合生成有色物质，以此测定多糖的含量。 试剂（1)0.1%三氯化铁盐酸溶液 准确称取三氣化铁(FeCl3 • 6H20 )0.1 g , 放入清洁 的试剂瓶内，加盐酸100ml,待溶解后置2〜8°C冰箱保存。 (2 )地衣酚（3，5-二羟基甲苯）乙醇溶液 称取地衣酚lg ,放入10ml量瓶中，加95%乙 醇至10ml。临用前配制。 (3)25ug /ml核糖对照品溶液 测定法 量取1ml水，加人5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液，混匀后再加人0 .4ml地衣酚乙醇溶液， 混匀。水浴5分钟后置冰浴，在波长670nm处测定吸光度，作为空白对照。 先将供试品用水稀释至核糖含量不髙于25ug /m l，作为供试品溶液，量取1.0m l自“ 加 入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液” 起，同法操作。 分别取核糖对照品溶液0.1m l、0.2ml、0.4ml、0.6m l、0.8ml、1.O m l于10m l试管 中，每管依次加水0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、O ml,自“加人 5ml O.1%三 氯化铁盐酸溶液” 起，同法操作。 结果计算 以核糖对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程。将供试品 溶液的吸光度代人直线回归方程，求出供试品溶液的核糖含量。 供试品多糖含量 (ug/ml)=a*n/0.41 式中 a为供试品溶液的核糖含量，ug/ml; n 为供试品稀释倍数 0731 蛋白质含量测定法 第二法 福林酚法 (1owry法) 本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu 2+螯合形成蛋白质-铜复合物， 此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白 质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓 度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。 本法灵敏度高，测定范围为20〜250ug。但对本法产生干扰的物质较多，对双缩脲反应 产生干扰的离子，同样容易干扰福林酚反应，且影响更大。如还原物质、酚类、枸橼酸、 硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。 除另有规定外，按方法1操作；如有干扰物质时，除另有规定外，按方法2操作并需经方 法学验证。 方法1: 试剂 碱性铜试液:取氢氧化钠10 g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾 0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合作为乙液。 临用前，合并甲、乙液，并加水至500ml。 对照品溶液的制备:除另有规定外，取血清白蛋白（牛）对照品或蛋白质含量测定国家 标准品，