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ACE多态性和原发性高血压合并冠心病相关性研究 　　【摘要】 目的 评估血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与原发性高血压合并冠心病的关系。方法 选?择高血压组64例，冠心病组81例，原发性高血压合并冠心病组92例，健康对照组122例，采用聚合酶链反应技术检测ACE基因多态性,并比较其基因型及等位基因频率。结果 高血压与冠心病组ACE基因多态性分别与对照组比较均无统计学差异，原发性高血压合并冠心病组ACE基因型频率与对照组比较有统计学差异, ACE基因多态性与原发性高血压合并冠心病相关，P0．001。结论 ACE基因多态性可能是佛山地区原发性高血压合并冠心病的危险因素。 　　【关键词】 冠状动脉疾病;血管紧张素转换酶;聚合酶链反应;高血压 　　 　　原发性高血压和冠心病是常见的复杂性疾病，目前认为是基因和环境因素相互作用的结果。疾病的易感基因可对早期诊断和防治起重要的预警作用。目前很多研究表明肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system, RAS)与心血管疾病的发病和易感性、严重性以及预后关系密切；血管紧张素转换酶(ACE)是该系统反应的关键酶。ACE基因多态性成为了其中的一个研究热点，本实验主要是研究ACE多态性与原发性高血压合并冠心病相关性。 　　 　　1 资料与方法 　　 　　1．1 研究对象 佛山市第一人民医院心内科住院和门诊体检者(2004年8 月至2005年5月)，共计360人,均为佛山地区汉族人群。 　　1．1．1 健康对照组122例健康体检者,男68例、女54例，平均(61．08±10．59)岁，经病史、体检、实验室和心电图等检查除外冠心病、高血压、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者。 　　1．1．2 原发性高血压组64例，男40例、女24例，年龄(62．07±11．49)岁，诊断标准为:收缩压140 mm Hg和(或)舒张压90 mm Hg，两者有一项经核实即确诊。排除继发性高血压、冠心病、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者等疾病。 　　1．1．3 冠心病组82例，男43例，女41例，年龄(58．69±13．70)岁，诊断标准为:临床确诊的心肌梗死或有心绞痛症状者，经冠状动脉造影显示至少有1支冠状动脉管腔狭窄50％，排除高血压、心肌病、瓣膜性心脏病和先天性心脏病者等疾病。 　　1．1．4 原发性高血压合并冠心病组92例，男50例，女42例，年龄(60．23±12．82)岁，同时符合上述冠心病和原发性高血压的诊断标准。 　　1．1．5 对照组和其他各组相比,年龄和性别构成差异均无统计学差异(P0．05)。 　　1．2 研究方法 　　1．2．1 血液样本的采集 从受检者肘前静脉抽血5ml置于EDTA化试管，用于聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR ) 检测ACE 基因多态性。 　　1．2．2 ACE基因多态性测定 试剂盒由中国医学科学院基础医学研究所提供。取外周静脉血5ml置于EDTA抗凝管中,低渗法分离白细胞,用常规盐析法提取DNA,溶于TE溶液中,用PCR扩增ACE基因第16内含子目的片段。引物:正向5CTGGAGACC ACT CCC ATC CTT TCT3,反向5GAT GTG GCC ATC ACA TTC CTC AGA T3。PCR程序:94℃预变120 s, 94℃变性60 s,58℃退火120 s,72℃延伸90 s,30个循环后,再于72℃延伸300 s终止扩增。扩增产物加样于2%琼脂糖凝胶板上,溴化乙啶染色, 在100 V电压下电泳20 min, 紫外灯下观察结果。 　　1． 3 统计学方法 采用SAS8．1软件包作统计学处理, 根据资料要求采用基因计数法计算各组病例及对照组的基因型和等位基因频率；组间均数比较采用t检验，组间频数分布比较采用χ2检验， P0．05为有统计学意义。 　　 　　2 结果 　　 　　2．1 PCR扩增结果 ACE 基因第16 内含子目的片段经PCR扩增后,可形成两种不同长度的DNA 片段,即490 bp 的插入片段(Ⅰ)和190 bp 的缺失片段(D),PCR 产物经凝胶电泳和溴化乙啶染色后,在紫外光下可观察到3种条带:①单一的490 bp 条带,此为纯合子插入型(Ⅱ) ,这是人的DNA 模板中ACE基因的第16 内含子中存在287 bp长的序列；②单一的190 bp条带,此为纯合子缺失型(DD),是由于缺失这一序列而扩增出的；③490 bp和190 bp 两种条带,此为杂合子插入/缺失型(ID)(见图1)。 　　 　　2．2 对照组及其他各组的基因型频率适合度检测,显示皆达到Hardy-Weinberg平衡。 　　2．3 ACE的D/I多态性基