试验指导手册-生态试验中心.PDF

  实 验 指 导 手 册 课程代码： 课程名称： 微生物工程制药 授课对象： 生物制药 授课教师： 柯乐芹 授课时间： 2015-2016 学年第 2 学期     目 录 实验一 产淀粉酶菌株的分离筛选 1 实验二 产淀粉酶菌株的诱变育种 （1）产淀粉酶菌株的诱变剂量选择 4 （2）紫外线的诱变育种 6 （3）淀粉酶活力测定 ① DNS 法 8 ② 比色法测定α-淀粉酶的活力 9 实验三 发酵罐的认知 11 实验四 液体发酵法生产链霉素 15     实验一 产淀粉酶菌株的分离筛选    一、实验目的 了解特定代谢特征菌株分离的基本实验原理和基本操作过程，学会目标微生 物菌株分离纯化的基本操作方法，熟悉常规的微生物实验操作技术。  二、实验原理 初始的微生物菌种一般是从可能含有目标菌株的采样材料中获得的，这些采 样材料通常是特定环境的土壤、水体、腐败的动植物组织、自然发酵的基质或其 他相关材料。目标微生物的分离一般要经历采样、增殖培养、分离纯化和性能检 测等 4 个阶段。采集的样品需要经过特殊的增殖处理后才能使目标菌株数量在样 品中的比例有明显的提高，以保证后续的分离操作获得目标菌株的概率增加。增 殖的样品用无菌稀释液梯度稀释后涂布于适合目标菌株生长或鉴别的培养基平 板上，在一定的条件下培养形成若干个菌落，从众多菌落中挑选出疑似目标菌株 的菌落，并在纯化培养基平板上纯化至单一菌落，最后将纯种菌株接种到试管斜 面上，培养后低温保藏备用。  土样的采集可以取目标生态环境中离地表 5‐15cm 处的土样，将采集到的土 样放入已灭菌的聚乙烯袋或玻璃瓶中。如果采集的样品是腐烂或发酵的材料，一 般是多点取样，将样品混匀后按一定比例缩分至合适的分量作为样品。采集的样 品都应该在 24h 内进行增殖培养或分离，或者在4 ℃储存。 增殖培养是一种将采集样品中混合的微生物群体经过某些特定方式（如特殊 营养物质或抑菌物质，特定的温度、pH 或溶解氧浓度等）的处理使其中的目标 微生物种类和数量在样品培养物中的比例增加，而非目标微生物种类和数量比例 减少的培养方法。这种特定的处理方式可以使用促进目标微生物生长繁殖的选择 性培养基或培养条件，也可以用抑制其他微生物生长繁殖的选择性培养基或培养 条件。 自然界微生物种类繁多，有些