柑橘石蜡切片-Bio-protocol.PDF

/e1010196 DOI:10.21769/BioProtoc.1010196 柑橘石蜡切片 Paraffin Embedding Citrus Tissues and Sectioning 龙健梅，郭文武* 园艺植物生物学教育部重点实验室，园艺林学学院，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：guoww@ 引用格式 ：龙健梅，郭文武 . (2018). 柑橘石蜡切片 . Bio-101 e1010196. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010196. How to cite: Long, J. M. and Guo, W W. (2018). Paraffin embedding citrus tissues and sectioni ng. Bio- 101 e1010196. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010196. (in Chinese) 实验原理及目的：石蜡制片法即用石蜡作为包埋剂，将植物组织经固定、脱水、透明、 浸蜡后包埋在石蜡中，然后用切片机切片。石蜡切片可用于研究植物的发育和植物器官 及组织的结构，原位杂交，组织化学 (显示细胞内的某些化学成分) 等。具有易操作、 切片薄 (1-12 µm)、可永久保存等优点。 关键词：石蜡，切片，结构 材料与试剂 1. 纱布 2. 棕色瓶 3. 烧杯 4. 纸 5. 吸管 6. 盖玻片 7. 载玻片 8. 毛笔 9. 乙醇 10. 乙酸 11. 甲醛 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010196 DOI:10.21769/BioProtoc.1010196 12. 青霉素小瓶 13. 二甲苯 14. 石蜡 15. 洗洁精 16. 多聚赖氨酸 17. 染缸 18. 苏木精 19. 铁矾 20. 中性树胶 21. 盐酸 22. 福尔马林 23. 卡诺固定液 (见溶液配方) 24. FAA 固定液 (见溶液配方) 仪器设备 1. 真空泵 2. 4 °C 冰箱 3. 烘箱 4. 水浴锅 5. 60-65 °C 恒温箱 6. 包埋机 (Thermo Fisher Scientific, model: EC350-1) 7. 半自动轮转切片机 (Thermo Fisher Scientific, model: HM340E) 8. 摊片机 (Taiva, model: TK-218) 9. 通风橱 实验步骤 1. Day 1，取样固定 (保持组织在活体状态下的成分和结构) 卡诺或者FAA 固定液固定装于青霉素小瓶中的材料，抽真空30 min，室温下24 h， 4 °C 存储过夜。 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010196 DOI:10.21769/BioProtoc.1010196 2. Day 2，脱水 (除去组织内的水分，使细胞组织变硬，也便于透明剂进入细胞内) 30% 乙醇 → 50% 乙醇 → 70%乙醇，各脱水 1.5 h。材料在70%乙醇中过夜或者 4 °C 长期保存。 3. Day 3，继续脱水、透明、透蜡 3.1 70%乙醇中过夜的材料继续脱水；85% (1.5 h) →95% (1.5 h) → 100% (1 h) → 100% (1 h)。 注：为了使材料脱水彻底，纯乙醇要换2 次，每次 1 h 。 3.2 1/5 二甲苯 + 4/5 乙醇 (1 h) → 2/5 二甲苯 + 3/5 乙醇 (1 h) →3/5二甲苯 + 2/5 乙醇 (1 h) →4/5 二甲苯 + 1/5 乙醇 (1 h) → 纯二甲苯 (1 h) → 纯二甲苯 (1 h)。在装有材