中药指纹图谱研究的基础程序.PPT

第六节 中药指纹图谱 中药指纹图谱是目前最能满足表征中药成分整体特性的技术，其作为天然药物的质量控制方法在国内外已被广泛接受。《美国药典》、《英国药典》、《印度药典》及《WHO草药评价指南》均收载了指纹图谱技术。《中国药典》（2015年版）对一些品种采用了HPLC色谱指纹图谱以控制产品质量。中药指纹图谱是当前最符合中药特色的评价中药真实性、稳定性、一致性和有效性的可行方法。 一、中药指纹图谱的含义及建立的原则 中药指纹图谱系指药材、饮片、提取物或中药制剂等经适当处理后，采取一定的分析技术和方法得到的能够标示其化学的、生物学的或其他特性的图谱。中药指纹图谱的建立应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，并体现系统性、特征性、稳定性三个基本原则。 系统性指的是指纹图谱所反映的化学成分，应包括中药有效部位所含大部分成分的种类，或尽可能多的指标成分。 特征性指的是指纹图谱中反映的化学成分信息是具有高度选择性的，这些信息的综合结果，将能特征地区分中药的真伪与优劣。 稳定性指的是所建立的指纹图谱，在规定的方法与条件下，不同的操作者和不同的实验室应能作出相同的指纹图谱，其误差应在允许的范围内，这也是作为标准方法所必备的特征之一。 二、中药指纹图谱研究的基础程序 中药指纹图谱研究的基本程序包括:方案设计、样品收集、方法建立、数据分析、样品评价和方法检验等。 （一）方案设计 研究对象的确定 研究方法的选择 现代分析技术：包括光谱、波谱、色谱、核磁共振、X射线衍射及各种技术的联用。 （二）样品收集 样品的收集要强调真实性和代表性。研究指纹图谱的原药材、饮片、提取物及各类制剂和相关产品的收集量均不应少于10个批次，每批供试品取样量应不少于3次检验量，并留有足够的观察样品。 (三)供试品溶液的制备 应根据所含化学成分的理化性质和检测方法的需要，选择适宜的方法进行制备。制备方法必须确保尽可能多的化学成分在指纹图谱中反映出来。 (四)参照物的制备 建立指纹图谱应设立参照物，应根据供试品中所含化学成分的性质，选择适宜的对照品作为参照物；如果没有适宜的对照品，可选择适宜的内标物作为参照物。参照物的制备应根据检测方法的需要，选择适宜的溶剂配制而成。 (五)研究方法的选择和方法验证 方法的选择主要包括测定方法、仪器与试剂、测定条件等。根据所含化学成分的理化性质，选择适宜的测定方法，建议优先考虑色谱方法。对于成分复杂的中药材及其制剂，特别是中药复方注射剂，必要时可以考虑采用多种检测方法，建立多张指纹图谱。 以色谱法建立指纹图谱，所采用的色谱柱、薄层板、试剂、测定条件等必须固定。采用HPLC和GC法建立指纹图谱，其指纹图谱的记录时间一般为1小时;采用薄层色谱扫描来建立指纹图谱，必须提供从原点至溶剂前沿的图谱。 指纹图谱的色谱条件选择是整个研究检测方法过程中最重要、关键性的内容。以HPLC法为例，色谱柱、流动相、检测器、柱温和进样量等均是影响指纹谱建立的重要因素。 中药色谱指纹图谱的测定方法应进行精密度试验、重点性试验和样品稳定性试验等验证项目，以确保方法的可靠性、可重复性和耐用性。 (六)指纹特征的选择与技术参数 1. 共有指纹峰的标定采用色谱法建立指纹图谱，必须根据参照物的保留时间计算指纹峰的相对保留时间，根据10批次以上供试品的检测结果，标定共有指纹峰。 2. 共有指纹峰面积的比值以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作为1，计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值;以内标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中其中一个峰(要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰)的峰面积作为1，计算其他各共有指纹峰面积的比值。各共有指纹峰的峰面积比值必须相对固定。 3. 相似度评价 相似度(similarity extent )是评价样品和对照品图谱一致性程度的参数。相似度的计算可借助软件完成，如国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》。