胡萝卜LEA基因家族新成员DcLEA1的克隆及其结构与表达特性分析.PDF

882 　 14 　8 　2004 8 胡萝 卜LEA 基因家族新成员DcLEA1 的 克隆及其结构与表达特性分析＊ 1 1 1 2 1 ＊＊ 刘一鸣 　刁丰秋 　张　雷 　黄美娟 　吴乃虎 1., 100080; 2., 100087 摘要　　利用改进的cDNA 代表性差示分析(RDA )技术, 从调控 态的胡萝卜体细胞胚中分离到 LEA 基因片段, 以该片段为探针筛选调控 态的胡萝卜体细胞胚的cDNA 文库及用控渗法构建的 基因组文库, 获得了胡萝卜LEA 基因家族的 一个新成员DcLEA1 (GenBank 注册号:AF308739). 该基因转录区由 ′U TR 区、 两 个外显子、 一个内含子及3′U TR 构成, 启动区长1.2 kb;开放阅读 框为480 bp, 编码1 9 个氨基酸和 一个终止密码子.Northern 杂交分析表明, DcLEA1 基因在胡萝 卜成体中无表达活性;在调控 态的胡萝卜体细胞胚中具有高表达活性;在解调控 12h 的胡萝卜 体细胞胚中, 转录本含量急剧下降;随着解调控时间的延长, 胡萝卜体细胞胚根开始延伸, DcLEA1 基因的表达活性又有所增加.这 一现象与LEA 基因在种子休眠和萌发过程中表达活性的 变化规律相似.由此推测, 可以利用胡萝卜体细胞胚蔗糖调控-解调控体系, 来模拟种子休眠与萌 发的过程, 研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理. 关键词　　　LEA 　　 　　 mRNA, , LEA mRNA, [1] ., (late embryogenesis abundant proteins), LEA ., 、 、 、 、 [2] .7 % MS , , LEA [ ～8] ., LEA ; 1%MS , , [9, 10] . , . , , , , [ 11] D7LEA 4 % . LEA 、 [3] [9] . , , [4] 1981 , Dure , 　2003-11-19 , 2004-01-08 　 ＊( 　＊＊, E-mail:nhw u @genetics.ac.cn 　14 　8 　2004 8 883 [ 12] . , , , , , , LEA , . , , 1.2　cDNA 文库的构建与筛选 [13] .LEA 0.6g, Quick- , prep Micro mRNA (Pharmacia ) ,