我们需要一个更加有效的方法来使代谢途径构建的过程流线化.PPTVIP

ePathBrick: A Synthetic Biology Platform for Engineering MetabolicPathways in E. coli 李思梦 导师：陈涛 研究目的与意义 作为一个新兴学科，合成生物学在设计、构建、优化代谢途径使其达到期望表型中的作用越来越大。然而，在一个多基因途径的不同表达水平中，如何把各酶的表达水平协调起来从而达到最优的催化效果仍然是一个巨大的挑战。因此，对细胞进行精细的调控使得细菌能够对环境刺激做出精确的应答，驱使碳通量流向目标途径。例如，同时在大肠杆菌进而酵母菌中，通过改变启动子结构来改变其转录水平；核糖开关与核糖结合位点能够在翻译水平精确调控蛋白质的表达等等。由此可以看出，合成生物学的进步大大加速了我们设计构建特定代谢工程菌株。 到目前为止，很多合成生物学的方法已经应用于代谢途径优化，包括质粒拷贝数的改变、启动子强度、基因密码子使用。然而，这些技术方法都不是模式化的，而且要达到预期效果很耗时间，这大大限制了我们开发菌株的代谢潜能。从工程化的角度来看，我们需要一个更加有效的方法来使代谢途径构建的过程流线化，从而使得系统的构建更加简单而又快捷。 Compatible sticky ends can be generated by four isocaudamer pairs (AvrII, NheI, SpeI,and XbaI) with unique DNA recognition sequence. The resulting sticky ends can be rejoined together uponsimple ligation thereby nullifying the old restriction sites. The basic configuration of engineered ePathBrick vectors. The dose response ofpromoter activity to inducer IPTG using eGFP as a reporter among the fi ve engineered ePathBrick vectors harbored by E. coli BL21*(DE3) in LBmedia at 30 °C. 总结 利用细胞工厂来生产恩物燃料和药物类分子刺激人们去开发新的合成生物学工具来改造途径工程和优化工作。这篇文献报道了一系列载体，这些载体与生物砖与其在代谢工程中的应用相兼容。工程化的生物砖载体包含4个限制性酶切位点，这些酶切位点都位于特定位置，因此不同的调控信号能够重复利用。通过操纵子中组合的多个转录水平的激活或者抑制这些载体能够协调基因的表达。同时，生物砖载体支持途径组分的分子装配与途径多样性的产生。这篇文献还证明了一个组装进一个单个生物砖载体的7基因途径的功能。这篇文献展示的生物砖载体提供了一个万能的平台，可以用来大肠杆菌代谢途径的快速设计与优化。 * Metabolic Engineering Systems Biology Laboratory 主要内容 研究的目的与意义 1 实验方法 2 * Metabolic Engineering Systems Biology Laboratory