水禽雷氏杆菌症3价不活化菌苗之效力试验-动物疾病研究报告行动.DOC

PAGE 2家畜衛試所研報No.44： PAGEREF zztitle \* MERGEFORMAT 1~ = PAGEREF zztitle 1+ NUMPAGES 10-1 \* Arabic \* MERGEFORMAT 10 (2009) PAGE 2 TOC \o 1-3 \n 水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗 PAGE 63家畜衛試所研報No.44： PAGEREF zztitle \* MERGEFORMAT 63~ = PAGEREF zztitle 63+ NUMPAGES 6-1 \* Arabic \* MERGEFORMAT 68 (2009) PAGE 63 *抽印本索取作者行政院農業委員會家畜衛生試驗所 水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗 喻昭芳＊、黃金城 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 摘要　為瞭解自行研發的水禽雷氏桿菌症第1、2和6血清型3價不活化菌苗大量產製後應用於田間水禽場，其菌苗對鴨及鵝隻的保護力是否與之前實驗室內小批進行的結果一致。將量產1萬劑量菌苗分別實施於北京鴨場，番鴨場與白羅曼鵝場，適齡時帶回本所攻毒，以Beherens-Karber法計算LD50防禦指數評估菌苗效力。試驗成績均可達到其他不活化菌苗國家動物用藥品檢定標準，顯示免疫本菌苗後經人工感染可產生良好的保護效果。有鑑於乾淨試驗動物難尋，另嘗試使用小白鼠測試，結果顯示小白鼠免疫3價菌苗後，血清凝集抗體及ELISA抗體價均可快速爬昇，免疫後攻毒成績亦說明人工感染可成立。 關鍵詞：水禽雷氏桿菌，不活化菌苗，田間效力試驗，小白鼠模式 PAGE 70家畜衛試所研報No.44： PAGEREF zztitle \* MERGEFORMAT 63~ = PAGEREF zztitle 63+ NUMPAGES 10-1 \* Arabic \* MERGEFORMAT 72 (2009) PAGE 70 PAGE 69 TOC \o 1-3 \n \* MERGEFORMAT 水禽雷氏桿菌症３價不活化菌苗之效力試驗 PAGE 69 緒言 由Riemerella anatipestifer（RA）引起的水禽雷氏桿菌症為台灣重要的水禽傳染性疾病，鴨和鵝在1~8週齡時對本病最具感受性，主要引起病禽敗血症、全身性漿膜炎、恢復禽隻生長遲緩及不合格屠體增加﹝9﹞，不良的飼養環境及其他疾病併發皆會造成本病的爆發，發病率可由5%~75%﹝3﹞，發病場常一再發病，且清除不易而重複發生，造成業者經濟損失﹝9﹞，故發展有效菌苗防疫為一必然趨勢。 本菌的血清型別複雜，目前共有21種血清型別﹝3、16﹞，Loh及張等人發現第5與第9型間；第12與6和16型間；第13與17型間；以及第17與第2和13型間具微弱交叉反應，其餘之間皆無交叉保護力﹝5、6、14﹞，而造成預防上的困難。最理想的方式是突破血清型別的限制，找出可產生保護力之致病或毒力因子來開發菌苗防疫﹝7﹞，目前雖有本菌相關毒力因子的報告﹝8、12、20﹞，但病原的致病機轉仍不明，國內亦缺乏快速檢測試劑與商業化疫苗﹝2﹞，所以現階段施打有效的多血清型多價菌苗，應是最佳的防治方式與暫時解決的方法。 96年本所已選定臺灣流行之第1、2和6血清型菌株研製與開發3價不活化菌苗﹝10﹞，並已製備小批菌苗於實驗室測試，結果顯示不論使用於北京鴨、番鴨亦或白羅曼鵝，其保護效果皆令人滿意。本次研究則進一步瞭解此3價菌苗大量產製後應用於田間水禽場，其菌苗對鴨及鵝隻的保護力是否與之前實驗室內小批進行的結果一致。本病在台灣水禽場與孵化場普遍污染，乾淨試驗動物取得困難，另嘗試同時免疫小白鼠與鴨隻獲得兩種動物的效力成績後進行評估，以瞭解是否可使用小白鼠模式測定取代對象動物。 材料與方法 3價不活化菌苗製備 將96年選定的台灣田間分離第1、2和6血清型RA菌苗株於37℃下培養於胰蛋白浸膏培養基（Tryptic Soy Broth, BD）18~22小時大量產製，以0.3%福馬林溶液（Formaldehyde Sol. 37%, Merck）予以不活化，離心調整至適當濃度，再加上氫氧化鋁膠（Aluminum Hydroxide Gel）調製成3價不活化菌苗﹝13﹞ 效力試驗 於第1及2週齡時在實驗室免疫北京鴨與白羅曼鵝各約45隻，另未注射各45隻供作對照，而在4週齡時使用同型（homologous）3種血清型菌株各分3階段濃度菌液（如：1010、109、108CFU/mL）每階段5隻動物分別肌肉注射攻毒免疫組及對照組，攻擊後觀察2週內兩組死亡結果，以Beherens-Karber法計算兩組LD50防禦指數（例：免疫組之LD50為1010.0，對照組為109.0，則兩組之LD50