以人参皂苷Rg1为配基的亲和色谱介质的制备与初步应用.PDFVIP

学 报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１０，４１（５）：４５１－４５５ ４５１ 以人参皂苷Ｒｇ１为配基的亲和色谱介质的制备与初步应用 刘　倩，寇俊萍，黄娅琳，乐心逸，余伯阳 （中国药科大学中药复方研究室，南京２１１１９８） ＴＭ 摘　要　通过偶联人参皂苷Ｒｇ１（Ｒｇ１）与环氧活化琼脂糖凝胶６Ｂ（ｅｐｏｘｙａｃｔｉｖａｔｅｄＳｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ，ＥＡＳ６Ｂ），制备以Ｒｇ１ 为配基的亲和介质，以红外色谱法验证其偶联，并采用正交设计方法优化偶联条件为４０℃，ｐＨ１３，每毫升ＥＡＳ６Ｂ添加Ｒｇ１ １００ ｍｏｌ；以此条件放大工艺制备的亲和介质偶联率为３１４７％，偶联量为３１５６ ｍｏｌ／ｍＬ；利用Ｒｇ１ＥＡＳ６Ｂ亲和介质，以 μ μ 系列亲和色谱法，从ＰＣ１２细胞蛋白裂解液中筛选得到１个Ｒｇ１特异性结合蛋白的条带，为制备含有类似活性基团的中药 有效成分的亲和色谱介质提供参考依据，也为进一步探讨人参皂苷Ｒｇ１的作用机制奠定基础。 关键词　亲和色谱；介质；人参皂苷Ｒｇ１；环氧活化琼脂糖凝胶６Ｂ；正交设计；高效液相色谱法 中图分类号　Ｑ５０３　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１０）０５－０４５１－０５ ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈＧｉｎｓｅｎ ｏｓｉｄｅＲｇ１ａｓａｌｉｇａｎｄ  ＬＩＵＱｉａｎ牞ＫＯＵＪｕｎｐｉｎｇ牞ＨＵＡＮＧＹａｌｉｎ牞ＹＵＥＸｉｎｙｉ牞ＹＵＢｏｙａｎｇ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｏｍｐｌｅｘＰｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＴＣＭ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１１１９８牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ１牗Ｒｇ１牘ｉｓｏｎｅｍａｊｏｒａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂ牞ＧｉｎｓｅｎｇＩｔ ｓｈｏｗｅｄｒｅｍａｒｋａｂｌｅｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏＩｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒ ｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔａｒｇｅｔｏｆＲｇ１ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌａｎａｔｉｏｎｏｆｉｔｓａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ牞ｔｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｍｅｄｉｕｍＲｇ１ｅｐｏｘｙａｃｔｉ ＴＭ ｖａｔｅｄｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ牗ＥＡＳ６Ｂ牘ｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｃｏｕｐｌｉｎｇＲｇ１ｔｏＥＡＳ６ＢＴｈｅｃｏｐｕｌａｔｉｏｎｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙａ ４ Ｌ牗３牘ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ牞ａｎｄｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙＩＲＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｕｐｌｉｎｇｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｓ４０℃牞 ９ ｐＨ１３牞ｎ牗Ｒｇ１牘∶Ｖ牗ＥＡＳ６Ｂ牘＝１００ ｍｏＬ∶１ｍＬａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＴｈｅ μ ｃｏｕｐｌｉｎｇｒａｔｅａｎｄｙｉｅｌｄｗｅｒｅ３１４７％ ａｎｄ３１５６ ｍｏｌ／ｍＬｉｎａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎＦｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ牞ａｓｐｅｃｉｆｉｃ μ ｐｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｗａｓｆｏｕｎｄｆｒｏｍＰＣ１２ｌｙｓａｔｅｕｓｉｎｇＲｇ１ＥＡＳ６ＢｍｅｄｉｕｍｂｙｓｅｒｉａｌａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｆｒｏｍＰＣ１２ ｃｅｌｌｌｙｓａｔｅＴｈｅｓｔｕｄｙｍａｙｐｒｏｖ