小鼠H22皮下移植肝肿瘤模型构建及干预效果和分子机制初探.docVIP

小鼠H22皮下移植肝肿瘤模型构建及干预效果和分子机制初探 　　摘要：目的 分析并探讨雷氏蛛毒以及有氧运动对小鼠H22皮下移植肝肿瘤的应用效果，并分析其细胞的分子机制，以期为今后的肝癌治疗方向提供一定的理论依据。方法 选取60只小鼠，采用皮下移植的方法构建出肝部肿瘤的模型，并将这些建模鼠平均分为模型组、雷氏蛛毒组以及有氧运动组，并在建模3d之后对其使用雷氏蛛毒注射以及有氧运动干预的方法。采用苏木精-伊红染色法测定三组小鼠的肝部肿瘤显微结构；免疫组化方法测定小鼠肿瘤中突变型P53等蛋白水平的差异性；荧光定量技术检测肿瘤野生型P53等信使核糖核酸的表达水平。结果 苏木精-伊红染色结果：模型组小鼠无组织坏死，雷氏蛛毒组出现较大坏死区，有氧运动组细胞排列不规则；免疫组化实验检测结果：雷氏蛛毒组阳性表达高于其他组，有氧运动组阳性表达最低；荧光定量检测结果：雷氏蛛毒组及有氧运动组的凋亡抑制蛋白表达低于对照组。结论 雷氏蛛毒及有氧运动方法对H22肝部肿瘤具有抑制作用，并能降低突变型凋亡抑制蛋白以及信使核糖核酸的含量，提升野生型P53、P21基因以及相关蛋白的含量。 　　关键词：皮下移植；肝部肿瘤；分子机制 　　肝部肿瘤是临床中常见的恶性肿瘤之一，是我国的第二大癌症，发病人数众多，每年约有超过10万人死于肝癌，其凭借高发病率、高死亡率等特点严重威胁人们的生命健康[1-3]。在这样的背景下，应寻求一种有效的治疗方法。在临床中常见的治疗方法有手术治疗以及放疗、化疗等，但治疗效果并不明显。雷氏蛛毒及有氧运动对肝部肿瘤具有明显的抑制作用。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选择由北京华阜康生物科技股份有限公司培育的60只昆明小鼠为研究对象，将其平均分为模型组，雷氏蛛毒组以及有氧运动组，每组20只。在小鼠后颈部皮下注射0.2ml的H22肝部肿瘤细胞株悬液进行建模。 　　1.2 方法 雷氏蛛毒组：在建模成功3d后静脉注射0.3ml的雷石柱毒素，连续注射20d；有氧运动组：建模3d后将小鼠放入30℃的温水当中让其进行有氧游泳训练法，30min/d，1w训练5d，一共训练5w。 　　1.3实验对象处理 在治疗5w后将三组小鼠麻醉，采用颈椎脱臼的方法将小鼠处死并取出肿瘤组织和肝脏称重。称重后将其放置于10%的多聚甲醛溶液中固定15h，包裹石蜡制成组织切片，进行分子机制研究分析。 　　1.4实验方法 ①苏木精-伊红染色法：将组织切片脱蜡脱水后使用苏木精-伊红染色，在光学显微镜下观察肝部肿瘤组织结构；②免疫组化实验法：使用免疫组织化学染色的方法检测肿瘤组织的P53、P21等基因的表达；荧光定量PCR检测法：提取小鼠20?J的肝部肿瘤组织，并使用试剂盒提取出总的核糖核酸，使用焦碳酸二乙酯水将核糖核酸的浓度调到1 μg/μl 。最后将反应物放置在由海山富科学仪器有限公司生产的PCR仪器中，检测三组小鼠肝部肿瘤的野生型P53、P21基因。 　　1.5统计学方法 本次研究当中的所有数据均采用SPSS13.0统计软件对研究对象的相关数据进行处理，计数资料采用率（%）表示，P0.05表示差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1一般结果 在建构模型的过程中，三组小鼠无死亡情况，肿瘤模型建构成功后，随着肿瘤的生长，三组小鼠的食欲及精神状态由最初的良好转变为食欲不振、精神萎靡，但雷氏蛛毒组及有氧运动组小鼠情况优于模型组。 　　2.2 肝部肿瘤结构显示结果 模型组的肿瘤细胞排列整齐，呈现圆形及椭圆形形状，能观察到大量的巨型肿瘤细胞，肿瘤的实质和间质模糊；雷氏蛛毒组：肿瘤细胞排列稀疏，细胞核大量坏死；有氧运动组肿瘤细胞排列稀疏，坏死区域明显，细胞质呈现出空泡化的情况。 　　2.3 免疫组化对P53、P21基因的检测结果 小鼠的肝部肿瘤突变型P53、P21、细胞凋亡基因以及凋亡抑制蛋白的表达在细胞核和细胞浆等位置，模型组的P53基因和凋亡抑制蛋白表达占42%，高于雷氏蛛毒组和有氧运动组的12%和18%；P21基因和细胞凋亡基因的表达中，雷氏蛛毒组和有氧运动组为37%和38%高于模型组的8%。三组对比具有统计学意义（P0.05）。 　　2.4肝部肿瘤野生型分子机制表达 模型组小鼠肝部肿瘤野生型P53基因的信使核糖核酸表达量最低，数据为0.4和，雷氏蛛毒组的表达量为5.6，而有氧运动组的表达量为3.7，雷氏蛛毒组以及有氧运动组高于模型组，结果差异具有统计学意义（P0.05）。而模型组、雷氏蛛毒组和有氧运动组的凋亡抑制蛋白的信使核糖核酸表达量为11.5、2.0、3.9，模型组高于其他两组。 　　3 讨论 　　肝部肿瘤是常见的恶性肿瘤之一，因其具有潜伏期长、死亡率高等特点，成为了威胁人们生命健康的头号杀手。在本次研究中，对60只昆明小鼠进行皮下移植法