酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母-中国科学院生态环境.PDFVIP

第 卷第 期 生 态 毒 理 学 报 3 1 Vol.3,No.1 年 月 AsianJournalofEcotoxicology 2008 2 Feb.2008 酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母 * 李剑,马梅 ,饶凯锋,王子健 中国科学院生态环境研究中心 环境水质学国家重点实验室,北京 100085 摘要:应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类 抗雌激素化合物和环境样品的类 抗雌激素 / / 活性 采用多聚酶链反应( )法扩增人雌激素受体( )基因,构建诱饵质粒 ;分别提取并纯化 . PCR hER pGBKT7-ERLBD 两种含有 共激活因子基因的靶质粒 和 ;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞 ER pGAD424-GRIP1 pGAD424-SRC1 ,于营养缺陷型培养基( )上筛选阳性菌落,分别构建两种 双杂交酵母 和 Y187 SD/-Trp/-Leu ER ER+GRIP1 ER+SRC1. 考察双杂交酵母与不同激素: 雌二醇( )、二氢睾酮( )、孕酮( )以及三碘甲状腺原氨酸( )的结合情况, 17β- E DHT PG T 2 3 并考察了雌激素受体拮抗剂 羟基他莫昔芬( )与酵母的相互作用 结果表明: 和 酵母均 4- 4-OHT . ER+GRIP1 ER+SRC1 能够专一性的和 结合,并存在显著的剂量 效应关系, 对 和 酵母 半乳糖苷酶活性诱导的 E - E ER+GRIP1 ER+SRC1 β- 2 2 -11 -1 -10 -1 值分别为 · 和 · ,其中 酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于 EC 7.3×10 molL 1.5×10 molL ER+GRIP1 ER+ 50 酵母细胞 能够抑制 诱导 酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量 效应关系, 值为 SR