白木香结香树脂部内生真菌的分离及其结香菌筛选-江苏农业科学.PDF

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第２０期 — ２８５— 黄秋伟，王丽萍，黄显雅，等．白木香结香树脂部内生真菌的分离及其结香菌筛选［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（２０）：２８５－２８９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．２０．０７１ 白木香结香树脂部内生真菌的分离 及其结香菌筛选 黄秋伟，王丽萍，黄显雅，黄惠芳，李慧敏 （广西壮族自治区亚热带作物研究所，广西南宁５３０００１） 　　摘要：采用平板培养法对白木香结香部位内生真菌进行分离，以沉香主要成分苄基丙酮作为结香菌的耐药指标， 采用改进的菌块法进行耐药能力的筛选。结果表明，从结香部位分离出１１株内生真菌，经形态学及分子初步鉴定归 于３目４科５属，其中在数量上，镰刀菌属为优势种群，其次为木霉属。经苄基丙酮耐药筛选发现，镰刀菌属的Ｇ７耐 药水平较高，对苄基丙酮的剂量变化不敏感，将其选作人工结香菌，效果有所显现，结香时间大为缩短。 　　关键词：白木香；内生真菌；苄基丙酮；人工结香 　　中图分类号：Ｓ１８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）２０－０２８５－０５ 　　 白木香 ［Ａｑｕｉｌａｒｉａｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｏｕｒ．）Ｇｉｌｇ］为瑞香科 香族化合物，苄基丙酮、对甲氧基苄基丙酮是沉香芳香族化合 （Ｔｈｙｍｅｌａｅａｃｅａｅ）沉香属（Ａｑｕｉｌａｒｉａ）植物，别称土沉香、女儿 物的代表性成分。近年来，我国珍稀濒危药用植物内生真菌 香、莞香，为我国特有的珍贵药用树种，主产于海南、广东、广 及其活性成分的研究成为了药物开发的热点，国内外从多种 西等省（区）。其含黑色树脂的木质部称为沉香，系《中国药 药用植物内生真菌中筛选出各种生理活性成分陆续见有报 典》收载的品种，是目前紧缺的名贵药材和天然香料，具有行 道，且发现有一些活性成分具有与宿主植物相同或相似的生 ［３］ 气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效，主治胸腹胀闷疼痛、胃寒 理活性 。因此，当前国内外研究较多的是关于沉香内生真 ［１］ 呕吐呃逆、肾虚气逆喘急等症状 。目前，由于白木香的野 菌分离及其次生代谢产物活性成分，而对于促进结香的内生 生资源少，生长周期较长，自然条件下沉香的形成最少也要 菌研究报道仍较少。本研究对已结香的沉香部分进行内生真 １０年以上的时间，而且并不是所有的白木香都能形成沉香， 菌的分离和鉴定，选用苄基丙酮作为试验条件对分离得到的 所以即使通过人工种植白木香，也很难解决天然沉香产量问 内生真菌进行结香耐药性筛选，并通过人工结香试验，筛选出 题，不能满足市场需求。健康的白木香并不产生树脂，据目前 对白木香结香具有良好促进作用的菌株，为加快天然沉香的 研究表明，沉香形成机理是健康的白木香树干在受到损伤或 结香周期奠定理论基础。 者刺激情况下，其木质部细胞分泌出一种气味芬芳的防御性 １　材料与方法 黑色树脂，而这种防御性机制的引发主要与白木香受损后的 微生物浸染有很大关系。 １．１　材料 内生真菌（ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉ）是指生活在健康植物的各种 １．１．１　植物材料　白木香样品于２０１４年７月采自广西壮族 组织和器官内部的真菌，被感染的植物不表现明显的外在病 自治区灵山县武利镇鱼良村当地一株树龄为１００年白木香古 症，可通过组织学方法，从表面严格消毒的植物组织中分离的 树。因古树比较高大，根系深入地底，所以根部及叶片的组织 方法，以及从植物组织内直接扩增微生物ＤＮＡ的方法来证明 样品难以取得，取材部位为茎部的天然结香树脂部分。白木 ［２］ 其内生性 。对药用植物内生真菌的研究表明，内生真菌与