基因工程试验纲要-生物学试验教学中心.DOC

基因工程实验项目 实验一 培养基制备及大肠杆菌菌种活化 实验二 质粒提取及电泳 实验三 PCR钓取目的基因及电泳 实验四 PCR产物回收及电泳 实验五 PCR回收产物与T-载体连接 实验六 连接产物转化与蓝白斑筛选 实验七 重组子扩增及PCR鉴定 实验八 重组子酶切鉴定 实验一 培养基制备及菌种活化 【实验目的】：熟悉无菌操作规范，掌握菌种活化过程。 【实验原理】：菌种活化是逐级扩大培养过程，是为了得到纯而壮的培养物，即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物需要将保存的菌种进行2-3代的复壮过程，目的是使保存的菌种逐渐适应培养环境。 【实验仪器及材料】： 无菌操净台、高压灭菌锅、微量移液器、37度恒温培养箱、37度恒温摇床、含有大肠杆菌DH5а菌种。 【实验步骤】： 1. 实验用品准备阶段： 实验所需容器及材料：玻璃平板、50及500ml三角瓶、黄色及蓝色枪头、接菌环，抗生素。 2. LB培养基的配制：1L （1）液体LB培养基的配制： 胰蛋白胨 （Tryptone） 10g 酵母提取物（yeast extract） 5g NaCl 5g pH=7 （2）固体LB培养基的配制：上述物质溶解后加入琼脂粉15g 3. LB培养基及相关实验材料灭菌（121℃高压灭