一器械的清洗与消毒-生物学教学中心.DOCVIP

PAGE PAGE 细 胞 工 程 实 验? 讲 义 ? ? ? 长春师范大学生命科学学院 ?生物技术教研室 张丽娇 范亚军目录 实验室安全守则1 实验操作须知2 实验一 器械的清洗与消毒4 实验二 细胞培养液的配制7 实验三 原代培养9 实验四 培养细胞的活力测定12 实验五 动物细胞融合13 实验六 植物组织培养基的配制及西红柿无菌苗的准备15 实验七 植物叶片脱分化和再分化培养17 实验八 植物细胞悬浮培养及原生质体制备18 实验九（选做）细胞传代培养20 实验十（选做）细胞的冻存和复苏22 PAGE 24 实验室安全守则 一般规定 1、上课第一天请先熟悉环境，察看紧急冲洗站、洗眼站、灭火器、急救箱及安全梯等的位置，牢记“安全”是进行任何实验最重要的准则。 2、在实验室內请穿着实验服，避免穿凉鞋、拖鞋。留有长发者，戴帽套将头发捲入套內，或以橡皮筋束于后，以防止引火危险或污染实验。 3、在实验室内禁止吸烟、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服及杂物等。 4、所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得带出实验室。每组分配的仪器、耗材请确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用，实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境卫生。 5、实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作规程，注意上课所告知的注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，确切记下自己的结果，严禁抄袭，确定关闭不用的电源、水、酒精灯及煤气等。 6、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验室过夜。 7、实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及电源，离开实验室前记得洗手。 8、任何意外事件应立即报告师长，并应熟知相关的应急措施。 药品 1、使用任何药品，请先看清楚标示、注意事项，翻阅物质安全资料表，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2、新配制的试剂请清楚注明内溶物、浓度、注意事事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3、挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、b-mercaptoethanol、酚等）要在通风橱中戴手套量取配制，取用完后随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4、有毒、致癌药剂例如acrylamide（神经毒）、ethidium bromide（突变剂）、SDS、秋水仙素请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，应养成洗手的好习惯。 5、接触到病原材料或细菌，应迅速消毒。所有被污染的物品，在丢弃或重复使用前均需先灭菌，固体培养基不得倒入水槽或下水道中。 6、使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或安全吸球。 仪器 1、使用仪器前先了解其性能、配置及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸，勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2、使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，锁紧离心机转陀。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3、实验时不要用潮湿有汗的手去操作电器，不要用手紧握可能荷电的电器，不应以两手同时触及电器，电器设备外壳均应接地。万一不慎发生触电事故，应立即切断电源开关，对触电者采取急救措施。 4、使用微波炉加热时，不可有铝箔等金属物品，瓶盖必须松开，以免爆炸。加热后戴防热手套取出瓶子。 5、使用UV灯时，不要以眼睛直视UV，应隔着挡板观察，完毕立即关灯。 6、超净工作台內的酒精有机溶剂及易燃物（如甲醇、乙醇、乙醚、瓦斯等）要远离火苗，不可留置火焰燃烧，万一着火，应力持镇定，沉着处理。酒精或乙醚等着火时，应使用泡沫灭火剂或湿毛巾覆盖，勿使用水冲洗。 7、使用震荡器震荡培养时，注意三角瓶务必对称放置，并用橡皮筋等夹紧，勿使其摇晃摔出台面，否则需拆开并清除玻璃碎片与培养液。 实验操作须知 1、实验室设计与要求 实验室设计是由工作的目的和规模决定的，要合理布局，通常按自然工作程序先后安排成一条连续的生产线，避免有的环节倒排增加日后工作的负担或引起混乱。房屋可规划为洗涤室、灭菌室、配制室、无菌操作室、培养室、鉴定室、驯化移栽室等。 1. 1准备室 需备有的设备有：鼓风干燥箱、落水架、工作台、水池、水桶、水盆、试管刷等，主要用于玻璃器皿、用具和培养材料清洗；还需要有高压水龙头用于冲洗。 1.2灭菌室 需备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤器、用