Axsym雅培化学发光仪简易维修手册第3单元 操作原理.doc

第3单元 操作原理 单元目录表 概述 3-1 检测技术 MEIA反应原理 3-3 MEIA反应物 3-3 MEIA反应顺序 3-4 FPIA反应原理 3-7 FPIA反应物 3-8 FPIA反应顺序 3-8 REA反应原理 3-10 REA反应物 3-10 REA反应顺序 3-10 检测校准原理 3-14 反复校准 3-15 校准类型 3-15 质控品 3-16 曲线的储存 3-17 操作系统 开始检测 3-19 MEIA 3-20 FPIA 3-20 REA 3-20 转运到处理中心 3-21 处理中心 3-21 MEIA 3-22 FPIA 3-24 REA 3-24 卸载废液 3-26 反应容器 3-26 纤维杯 3-26 光检测 MEIA光读 3-27 FPIA光读 3-30 备 注 概述 雅培AxSYM系统使用三个不同的检测技术进行检测。 微粒酶免疫检测（MEIA） 荧光偏振免疫检测（FPIA） 辐射能衰减（REA） 本单元提供以下信息： 本系统所使用的三项技术 每项技术所使用的反应物 每项技术所使用的光检测理论 可供使用的校准类型及其重要性 与处理常规样品检测相关的事件顺序 用于数据减少的算术模型 用于质量控制的方法 备 注 检测技术 MEIA反应原理 微粒酶免疫检测技术（MEIA）使用悬浮溶液，亚微细粒胶乳颗粒检测分析物。微粒包被有专门用于接受检测的分析物捕获分子。微粒的有效表面区域增加检测动力学，减少检测孵育时间。这使得MEIA检测的完成时间低于其他免疫检测。 在取样中心，将进行一个检测所使用的反应物和样品转运到反应容器。将反应容器转运到处理中心，在此试剂和样品进行混合，将反应混合物转运到惰性玻璃纤维杯中。微粒不可避免的结合，导致免疫复合物被玻璃纤维所保留，而反应混合物快速流过纤维杯中的大孔。 将一个碱性磷酸酶标记物共轭体添加到玻璃纤维杯中，随后添加4-甲基伞形酮酰磷酸盐（MUP）。该共轭体刺激4-甲基伞形酮酰磷酸盐水解为甲基伞形酮（MU）。荧光甲基伞形酮的检测在其刚在纤维杯中产生时与检测样品中的分析物浓度成正比。 MEIA反应物 进行MEIA检测所需要的反应物： 包被有捕获分子的微粒（抗原，抗体或病毒颗粒） 本体溶液1－荧光底物，4-甲基伞形酮酰磷酸盐（MUP） 碱性磷酸酶标记物共轭体 MEIA反应顺序 MEIA检测有两种反应顺序类型或形式。 第一步 样品，微粒，以及共轭体结合到反应容器的孵育孔中。 第二步 样品和微粒结合在反应容器的孵育孔中，共轭体反应发生在纤维杯中。 注意：以下所描述的反应顺序用于阐明MEIA反应的基本原理。有关每个类型的详细说明，见图3.6：一般反应顺序对照。 通常的MEIA反应发生过程如下： 1． 分析物与微粒相结合。 样品与微粒结合，并在反应温度下进行孵育。在孵育阶段，分析物结合到微粒，产生免疫复合物。 2． 免疫复合物结合到玻璃纤维杯。 处理探针从反应容器的孵育孔吸取反应混合物，并将其分液到纤维杯。免疫复合物必然结合到玻璃纤维杯。纤维被洗液冲掉未结合材料。免疫复合物有玻璃纤维所保留，而多余的反应混合物则通过纤维杯中的大孔快速流走。 免疫复合物 玻璃纤维 图3.1： 免疫复合物结合到玻璃纤维杯 3． 共轭体完善免疫复合物。 处理探针将碱性磷酸酶标记物共轭体从反应容器中的试剂孔转运到纤维杯。共轭体与免疫复合物相结合，完善抗体－分析物－共轭体“三明治”。再次冲洗纤维杯。 4． MUP转化为MU。 本体溶液1分液器降低物4-甲基伞形酮酰磷酸盐（MUP）添加到纤维杯。碱性磷酸酶共轭体刺激MUP水解为4-甲基伞形酮（MU）。 5． MU的产生比率与分析物浓度成正比。 MEIA光检测在玻璃纤维杯上所产生MU和荧光产物的比率。MU在纤维杯上产生的比率与检测样品中的分析物浓度成正比。 有关MEIA光检测的详细说明，见本单元中的光检测。 抗－分析物微粒 样品 抗体－抗原复合物 碱性磷酸酶 抗体－分析物－特异性 抗体-抗原-抗体 碱性磷酸酶共轭体 复合物 4-甲基伞形酮酰 抗体-抗原-抗体 甲基伞形酮（MU） 磷酸盐（MUP） 复合物 是荧光。 检测MU产物的比率 图3.2： 常规MEIA反应顺序示意图 FPIA反应原理 荧光偏振免疫检测（FPIA）包括两项技术，用于确定分析物浓度： 竞争性蛋白结合 荧光偏振 竞争性结合需要两个抗原（分析物）系统： 来源于样品的分析物 由检测试剂提供的示踪剂标志物分析物 来源于样品的分析物与分析物示踪剂竞争抗体上的结合位置。每个分析物系统根据其相对浓度依附在结合位置上。 如果样品分析物存在高浓度，则会有更多样品分析物结合到抗体，从而使分析物