荧光定量PCR法检测重组毕赤酵母工程菌的外源-重庆理工大学学报.PDFVIP

第３０卷　第２期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１６年２月 Ｖｏｌ．３０　　Ｎｏ．２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｆｅｂ．２０１６  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１６．０２．０１４ 荧光定量ＰＣＲ法检测重组毕赤酵母工程菌的 外源基因拷贝数 １ １ ２ 郭晋霞 ，何云凤 ，范　开 （１．重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆　４０００５４； ２．重庆富进生物医药有限公司，重庆　４０００５０） 摘　要：提出了重组毕赤酵母工程菌ｐＰＩＣＺＤＴ３０／ＧＳ１１５基因组中外源基因ＤＴ３０拷贝数的实 时荧光定量ＰＣＲ方法。该重组工程菌用来表达人胰岛素前体（ＰＩＤＴ３０），其表达量的高低、菌 种稳定性对工艺研究及整体项目成本等有重大影响。外源基因拷贝数是检测表达量的一个重 要指标。该方法中，利用毕赤酵母的看家基因ＧＡＰ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）为 内参，分别建立含ＧＡＰ基因和ＤＴ３０基因的双标准曲线。将工程菌基因组进行荧光定量ＰＣＲ，根 据标准曲线和Ｃｔ值计算目的基因ＤＴ３０在重组毕赤酵母工程菌中的拷贝数，结果为７个。 关　键　词：荧光定量ＰＣＲ；表达；胰岛素前体；基因拷贝数 中图分类号：Ｑ３９　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１６）０２－００７７－０７ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＣｏｐｙＮｕｍｂｅｒｏｆ ＰｉｃｈｉａＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＢａｃｔｅｒｉａｗｉｔｈＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲＭｅｔｈｏｄ １ １ ２ ＧＵＯＪｉｎｘｉａ，ＨＥＹｕｎｆｅｎｇ，ＦＡＮＫａｉ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙａｎｄＢｉｄｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５４，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＦｕｊｉｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌＣｏ．，Ｌｔｄ．， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｏｆｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅＤＴ３０ｉｎｇｅｎｏｍｅｏｆｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｙｅａｓｔｐＰＩＣＺＤＴ３０／ＧＳ１１５ｂｙｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｗａｓｄｅ ｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｈｅｙｅａｓｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｐｒｅｓｓｈｕｍａｎｉｎｓｕｌｉｎｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（ＰＩＤＴ３０），ａｎｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ 　　收稿日期：２０１５－１０－２２ 作者简介：郭晋霞（１９８９—），女，山西人，硕士，主要从事基因工程药物研究。 引用格式：郭晋霞，何云凤，范开．荧光定量ＰＣＲ法检测重组毕赤酵母工程菌的外源基因拷贝数［Ｊ］．重庆理工大学学 ２０１６（２）：７７－８３． 报（自然科学版）， Ｃｉｔａｔｉｏｎｆｏｒｍａｔ：ＧＵＯＪｉｎｘｉａ，ＨＥＹｕｎｆｅｎｇ，ＦＡＮＫａｉ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＣｏｐｙＮｕｍｂｅｒｏｆＰ