复方氨基酸注射液中氨基酸分析报告应用及技术服务部.PDF

博纳艾杰尔产品应用案例 复方氨基酸注射液中氨基酸分析报告 AP10037 应用及技术服务部 摘要：本实验采用异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生剂，并在衍生过程中加入二巯基二丙酸(MPA)保护半 R 胱氨酸。同时采用反向高效液相色谱法，以正亮氨酸为内标物，使用Venusil○AA氨基酸分析方法 包，分析复方氨基酸注射液样品中氨基酸组成。本方法快速、灵敏、准确，特别适用于同时含有胱 氨酸和半胱氨酸的多肽氨基酸组成的测定。 R 关键词：高效液相色谱法；异硫氰酸苯酯(PITC)；复方氨基酸注射液；Venusil○AA ；胱氨酸；半 胱氨酸 前言 氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元。作为小分子， 氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用；作为配体，它可与多种 金属离子配位，为研究抗肿瘤、抗癌药物提供信息。各种氨基酸在生物体中具有不同的 生物功能，因此，准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要 的意义。 R R 本实验采用Venusil○AA氨基酸分析方法包中的检测标准，使用Venusil○AA氨基酸 分析专用柱对复方氨基酸注射液中的氨基酸组成进行了测试。 实验部分 仪器、试剂与材料 试剂材料 流动相A ：称取15.2 g 无水醋酸钠，加水1850 mL 溶解，用冰醋酸调节pH 至6.5， 然后加入乙腈140 mL，混匀； 流动相B ：乙腈︰水=80 ︰20 ； 稀盐酸：0.1 mol/L 盐酸； 二疏基二丙酸(MPA)溶液：取MPA 约8.0 mg ，加入200 mol/LNaOH 溶液1mL 溶 地址：天津经济开发区西区南大街179 号 邮编：300462 电话：022传真：022 Email ：service@ 网址： 客服：400-606-8099 博纳艾杰尔产品应用案例 解； 内标溶液：称取正亮氨酸10 mg，置于10 mL 容量瓶中，加稀盐酸溶解并定容至刻 度； 色氨酸：称取色氨酸10 mg，置于10 mL 容量瓶中，加稀盐酸溶解并定容至刻度； R 三乙胺乙腈溶液：取Venusil○AA 氨基酸分析方法包中三乙胺一瓶，加乙腈8.6 mL， 混匀； R 异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取Venusil○AA 氨基酸分析方法包中异硫氰酸苯酯溶液 1 瓶，加乙腈2.0 mL，混匀； R 氨基酸标准溶液：取Venusil○AA 氨基酸分析方法包中17 种氨基酸标准溶液(包括 门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪 氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、赖氨酸) 1.0 mL，加 色氨酸溶液0.5 mL ，稀盐酸3.5 mL 稀释，混匀； 复方氨基酸注射液样品：无色透明液体，由某医药科技公司提供。 样品制备 移取复方氨基酸注射液样品1.0 mL ，置于50 mL 离心管中，加入稀盐酸30 mL， 混匀，作为样品溶液，待衍生使用。 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生 取18 种氨基酸标准溶液（含色氨酸2.5 μmol/mL ）、上述复方氨基酸样品溶液各200 μL，分别置于1.5 mL 离心管中，向每个离心管中加入MPA 溶液 40 μL，再向每个离 心管中加入内标溶液20 μL，混匀，然后依次向每个离心管中加入三乙胺乙腈溶液100 μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100 μL，混匀，室温放置1 小时。再向每个离心