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l 全日制普通本科生毕业论文 ISSR分子标记分析杏鲍菇菌株遗传差异研究 ANALYSIS OF GENETIC VARIATION OF PLEUROTUS ERYNGII STRAINS BY ISSR MARKER 学生姓名： xxxx 学 号：xxxx 年级专业及班级： xxxxx 指导老师及职称： XXXX 学 院： XXXX 湖南·长沙 提交日期：2012 年 6 月 目 录 摘要………………………………………………………………………………...……1 关键词………………………………………………………………………………...…1 1 前言……………………………………………………………………………….…..2 1.1 杏鲍菇有效成分…………………………………………………………………2 1.2 杏鲍菇药理作用…………………………………………………………………2 1.3 分子标记技术研究现状……………………………………………………………2 2 材料与方法……………………………………………………………..………….…3 2.1 供试菌株……………………………………………………………………………3 2.2 培养基………………………………………………………………………………4 2.2.1 试管斜面培养基……………………………………………………………….…4 2.2.2 液体PDA培养基…………………………………………………………………4 HYPERLINK \l _Toc2947090312.3 主要仪器与试剂……………………………………………………………………4 2.4 试验方法……………………………………………………………………………4 2.4.1 菌丝培养……………………………………………………………………….…4 2.4.2 DNA的提取和检测………………………………………………………………5 2.4.3 ISSR反应体系优化………………………………………………………………5 2.4.4 ISSR引物的筛选…………………………………………………………………6 2.4.5 PCR产物的电泳检测………………………………………………………….…6 2.4.6 数据统计与分析…………………………………………………………………7 HYPERLINK \l _Toc2947090403. 结果与分析……………………………………………………………………….…7 3.1 DNA质量检测…………………………………………………………………..…7 HYPERLINK \l _Toc2947090423.2 ISSR反应体系的优化…………………………………………………………..…7 HYPERLINK \l _Toc2947090433.2.1 扩增程序的选择……………………………………………………………...…. 7 HYPERLINK \l _Toc2947090443.2.2 PCR反应体系的优化………………………………………………………...… 7 3.3 ISSR引物的筛选………………………………………………………………….8 3.4 ISSR扩增………………………………………………………………………….8 3.5 样品的相似系数及UPGMA聚类分析……………………………………….…9 HYPERLINK \l _Toc2947090484. 小结与讨论……………………………………………………………………...… 12 参考文献………………………………………………………………………………12 致谢……………………………………………………………………………………14 附录1……………………………………………………………………………….…15 PAGE 2 ISSR分子标记分析杏鲍菇菌株遗传差异 学 生：黄民凤 指导老师：刘东波 (湖南农业大学园艺园林学院，长沙，410128) 摘 要：杏鲍菇是近年来人工栽培成功的集食用、保健、药用功能于一体的珍稀食用菌。目前采用ISSR分子标记对其进行遗传差异研究较少，本试验以CTAB改良法-II对24个杏鲍菇品种进行了DNA的提取，应用ISSR技术分析了菌株的DNA序列多态性，从22条引物中筛选出11条ISSR引物对24个菌株基因组DNA进行PCR扩增。采用平均分类法UPGMA分析表明，相似系数为0.6250左右时，24个不同品种被分为4大类，20号菌株独成一类，说明20号菌株与其它各菌株遗传距离较远。其中，1与3，6，7，8，10，11，13的遗传相似系数相对较高，高达0.9510以上，说明