双载体断裂CFTR基因转移及翻译后的连接和功能Post-药学学报.PDF

60 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 ( 1) : 6065 双载体断裂CFTR 基因转移及翻译后的连接和功能 * 朱甫祥, 刘泽隆, 屈慧鸽, 迟晓艳 (鲁东大学生命科学学院, 山东 烟台 264025) 摘要: 囊性纤维化跨膜电导调节体 (CFTR) 基因突变导致一种常染色体隐性遗传病囊性纤维化 (CF), 利用 腺辅助病毒 (AAV) 载体转运CFTR 基因的基因疗法受到AAV 载体容量的限制。本文采用intein 的蛋白质反式 剪接技术, 以双载体转运 CFTR 基因, 研究了于其调节结构域 (R) 断裂成两部分的 CFTR 基因翻译后的连接及 其产生的Cl 通道功 。将人CFTR cDNA 于R 结构域的Ser712 密码子前断裂, 构建一对融合Ssp DnaB intein 编 码序列的真核表达载体。将这对载体共转染培养的幼年仓鼠肾 (BHK) 细胞, 通过瞬时表达, 全细胞和单通道膜 片钳记录Cl 电流, 并用Western blotting 观察CFTR 蛋白的剪接。结果表明, 共转染细胞显示较高的全细胞Cl 电流和单个 Cl 通道开放活性, 说明 CFTR 的 Cl 通道功 的恢复, 用 CFTR 特异性抗体进行的细胞总蛋白 Western blotting 显示有完整的CFTR 蛋白条带形成, 表明intein 可有效连接翻译后的两部分CFTR 蛋白。结果提 示, 蛋白质剪接技术可有效用于双载体系统转运 CFTR 基因, 为进一步应用双 AAV 载体转运 CFTR 基因的CF 基因治疗研究提供了实验依据。 关键词: 蛋白质反式剪接; 囊性纤维化跨膜电导调节体基因; 氯离子通道; 双载体系统 中图分类号: Q73 文献标识码:A 文章编号: 0513-4870 (2010) 01-0060-06 Post-translational ligation and function of dual-vector transferred split CFTR gene * ZHU Fu-xiang , LIU Ze-long, QU Hui-ge, CHI Xiao-yan (Life Science College of Ludong University, Yantai 264025, China) Abstract: The mutation of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene leads to an autosomal recessive genetic disorder cystic fibrosis (CF). The gene therapy for CF using adeno-associated virus (AAV) vectors delivering CFTR